#31  
قديم 12-06-2015, 06:30 PM
رافت ابراهيم رافت ابراهيم غير متواجد حالياً
عضو ذهبي
 
تاريخ التسجيل: Dec 2011
المشاركات: 520
افتراضي تداخل جينية في التوحد اضطرابات النمو العصبي: أسباب نقص mecp2 تخفيض تعبير عن ube3a وgabrb3

 


تداخل جينية في التوحد اضطرابات النمو العصبي: أسباب نقص MECP2 تخفيض تعبير عن UBE3A

و

GABRB3



التوحد هو اضطراب النمو العصبي شيوعا من مسببات وراثية معقدة. متلازمة ريت، وهو اضطراب السائد المرتبط X التي تسببها طفرات MECP2، ومتلازمة أنجلمان، اضطراب مطبوع الناجم عن نقص 15q11-Q13 أو UBE3A الأمهات، لديها المظهرية والتداخل الوراثي يعانون من مرض التوحد. MECP2 بترميز البروتين الميثيل الدليل السياسي الشامل ملزم 2 الذي يعمل كما وقامع النسخي للبنيات الجينات مثيلة لكن من المستغرب ليس مطلوبا للحفاظ على مطبوع التعبير الجيني. هنا، ونحن اختبار الفرضية القائلة بأن نقص MECP2 قد تؤثر على مستوى التعبير عن UBE3A والمرشح التوحد GABRB3 الجينات المجاورة دون أن يؤثر بالضرورة التعبير مطبوع. واستخدمت الأساليب الكمية متعددة بما في ذلك الكميات الآلي والمناعي والتهجين الموضعي عن طريق المسح الضوئي ليزر الخلوي على ميكروأرس الأنسجة، طخة مناعية وTAQMAN PCR في. أظهرت نتائج عيوب كبيرة في UBE3A / E6AP التعبير في اثنين Mecp2 سلالات الفئران تعاني من نقص المختلفة وريت الإنسان، Angelman والتوحد العقول مقارنة مع الضوابط. على الرغم من أن لا فرق لوحظ في التعبير أليلية من عدة نسخ مطبوعة في Mecp2 الدماغ -null، تم تخفيض Ube3a بمعنى التعبير بشكل ملحوظ، بما يتفق مع انخفاض في البروتين. A الجين غير مطبوع-من 15q11-Q13، GABRB3، ترميز الوحيدات β3 من GABA A مستقبلات، كما أظهرت انخفاض كبير في التعبير متعددة ريت، Angelman وعينات الدماغ مرض التوحد، وMecp2 الفئران تعاني من نقص كتبها طخة مناعية الكمي. هذه النتائج تشير إلى مسار متداخل من التقلبات الجينات داخل 15q11-Q13 في ريت، Angelman والتوحد وتوريط MeCP2 في تنظيم UBE3A وGABRB3 التعبيرات في أدمغة الثدييات ما بعد الولادة.
المقدمة

التوحد هو اضطراب النمو العصبي الوراثي معقدة تتميز إعاقات حادة في التفاعل الاجتماعي والتواصل والأنماط السلوكية التي هي مقيدة والنمطية (1). متلازمة ريت (RTT؛ OMIM 312750) هو المهيمن اضطراب النمو العصبي المرتبط X التي تسببها طفرات في MECP2، الذي يشفر بروتين ميثيل الدليل السياسي الشامل ملزم 2 (MeCP2) (2). متلازمة أنجلمان (AS؛ OMIM 105830) هو اضطراب مطبوع الناجم عن نقص الأمهات من كروموسوم 15q11-Q13، عيوب مثيلة أو طفرة الأمهات من UBE3A ترميز بتحول يغاز UBE3A / E6-AP (3). RTT وAS تشترك في السمات السريرية متداخلة مع التوحد بما في ذلك تأخر في النمو، وضعف اللغة، والمضبوطات والسلوكيات النمطية (4). وعلاوة على ذلك، أظهرت التقييمات السريرية للسلوك الاجتماعي وتيرة عالية من التوحد في المرضى الذين يعانون من RTT (5) وAS (6). A Mecp2 نموذج الفأر متحولة من RTT يظهر أيضا تشوهات في التفاعلات الاجتماعية (7). بالإضافة إلى ذلك، تم العثور على الطفرات MECP2 في عدد قليل من المرضى الذين شخصت إصابتهم AS (8) والتوحد (9، 10) و15q11-Q13 الازدواجية موجودة في ~1٪ من حالات التوحد (11)، مما يدل على التداخل في التسبب في هذه تختلف أعراض وراثية. GABRB3، ترميز GABA A مستقبلات β الوحيدات، ويقع داخل-Q13 15q11 (12) ويظهر بالتعاون مع التوحد (13، 14)، ولكن يتم التعبير عن biallelically (15). لقد أثبتنا سابقا عيوب التعبير MeCP2 في التوحد وAS عينات الدماغ عن طريق نهج كمي المناعي (16). في المقابل، مستوى التعبير من البروتينات المشفرة بواسطة الجينات داخل 15q11-Q13 في RTT، AS والتوحد لم تميزت أيضا.
MeCP2 بربط المواقع الدليل السياسي الشامل مميثل (17)، يقمع النسخ من بنيات مميثل (18)، والزميلة مع لونين المعدلة عوامل deacetylase هيستون (19، 20) وناقلة ميثيل الحمض النووي (21، 22). Mecp2 -null (23، 24) أو متحولة (25) الفئران ألخص النمط الظاهري من RTT وتبين أن MeCP2 ضروري لنمو الدماغ بعد الولادة الثدييات. وعلى الرغم من توقع MeCP2 أن يكون قامع النسخي العالمي، ندرة في الجينات المستهدفة MeCP2 تم تحديدها في Mecp2 الدماغ -null الماوس (26)، RTT الدماغ (27) أو خطوط الخلايا (28) من خلال التنميط التعبير الجيني. وقد تم التعرف على عامل موجه للعصب المستمدة ترميز الجينات في الدماغ كهدف من MeCP2 القمع النسخي حيث تم زيادة مستوى منخفض القاعدية من النسخ السابقة لتحفيز الخلايا العصبية في الخلايا العصبية Mecp2 -null (29، 30). كما أظهر H19 الجينات مطبوع زيادة التعبير في Mecp2 خلايا -null (21)، ولكن لم يحدد في السابق ما إذا كانت الزيادة ترجع إلى إزالة القمع من أليل الأب ميثليته. نظرا لوجود عدد محدود من الجينات المستهدفة MeCP2، ودور MeCP2 في التسبب في RTT وغيرها من اضطرابات التوحد لا يزال بعيد المنال.
على الرغم من MECP2 طفرة لا يؤثر التعبير مطبوع العديد من الجينات داخل 15q11-Q13 (31)، ونحن افترضنا أن MeCP2 يمكن أن تنظم مستوى التعبير عن الجينات في هذه المنطقة دون أن يؤثر بالضرورة تعبير أليل معين. هنا، علينا أن نبرهن على نتائج نقص Mecp2 إلى خفض كبير في UBE3A / Ube3a وGABRB3 / Gabrb3 التعبيرات في الماوس المخ دون تغييرات واضحة في التعبير أليل معين. وعلاوة على ذلك، لوحظ انخفاض كبير في UBE3A وGABRB3 التعبيرات في AS، RTT والتوحد البشري عينات الدماغية مقارنة مع الضوابط. هذه النتائج تظهر عيوب جينية متداخلة في هذه الاضطرابات النمائية العصبية متشابهة ظاهريا ولكن متميزة وراثيا وتوريط MeCP2 في تنظيم التعبير الجيني داخل 15q11-Q13.

النتائج

انخفاض التعبير UBE3A في Mecp2 الفئران ناقصة

كأثر غير الخلية-مستقلة المهيمن Mecp2 طفرة في البرية من نوع (وزن) -expressing خلايا Mecp2 الفسيفساء - / + إناث وقد وصفت (32)، أجرينا خلية واحدة التحليلات الكمية للمتحولة (طن متري) -expressing (MeCP2 سلبي) والخلايا (MeCP2 إيجابي)، معربا عن بالوزن لUBE3A المناعي على ميكروأري الأنسجة عن طريق المسح الضوئي ليزر الخلوي (LSC). أثبت هذا النهج انخفاض 1.5-2 أضعاف استنساخه في UBE3A مناعية في 10 Mecp2 - / + واثنين من Mecp2 - عينات الدماغية / ص من اثنين من سلالات مختلفة Mecp2 -null (23، 24). مقارنة مع الضوابط WT (الشكل 1 A و ب). كل من الخلايا، معربا عن طن متري من Mecp2 - / + وMecp2 - / ص (رسوم بيانية الزرقاء) ووزن، معربا عن الخلايا من Mecp2 - أظهرت / + المخ (رسوم بيانية الحمراء) أقل بكثير التعبير UBE3A مقارنة مع الخلايا معربا عن WT-من Mecp2 + / + المخ (رسوم بيانية البرتقالية). للتدليل على أن العيوب لاحظت في Mecp2 - / + وMecp2 - / كانت عينات المخ ص الواقع بسبب الاختلافات في التعبير UBE3A، وليس الكشف المناعي، وأجريت تحاليل طخة مناعية (الشكل 1 C). وقد لوحظ انخفاض UBE3A / E6-AP التعبير طخة مناعية لكلا Mecp2 - / + وMecp2 - / ص عينات الدماغ من كلا Mecp2 سلالات -null مقارنة مع الضوابط ولكن مع أهمية أقل من النتائج الخاصة بمركز حلول Lexmark. أخذ عينات دقيقة من الخلايا وحيدة داخل القشرة الدماغية في التحليل LSC مقارنة مع تحليل الدماغ كله طخة مناعية قد يفسر حساسية أكبر للنهج LSC. هذه النتائج تثبت أن بروتين تعبير UBE3A في القشرة الدماغية ينخفض ​​كل من الآثار خلية مستقلة وغير الخلية-المتمتعة بالحكم الذاتي في Mecp2 الطفرة.

الشكل 1. UBE3A التعبير في Mecp2 الماوس -null الدماغ. (A) A ميكروأري الأنسجة المتعدد التي تحتوي على وزن وخروج المغلوب الماوس عينات القشرة المخية (16) كانت ملطخة للالمناعي باستخدام محطة C رد الفعل المضادة للMeCP2 والأجسام المضادة لمكافحة UBE3A. الخلايا MeCP2 سلبي (Mecp2، رسوم بيانية الزرقاء، معربا عن طن متري، نسبة معروضة) تم بوابات منفصلة عن خلايا MeCP2 إيجابية (التعبير عن WT-Mecp2، رسوم بيانية الحمراء)، ومجموع السكان (رسوم بيانية السوداء) وبالمقارنة مع السيطرة العمر المتطابقة WT عينات الإناث أو الذكور (رسوم بيانية البرتقالية). (B) ويظهر الرسم البياني دمج نتائج LSC (يعني ± SEM) من أربعة تكرار الشرائح باستخدام اثنين من مختلف أضداد UBE3A. جرى التحقيق مقتطفات (C) البروتين من كامل دماغ الفأر الكبار على طخة مناعية مع مكافحة UBE3A أو مكافحة GAPDH. وتظهر صورة ممثل انخفاض التعبير في دماغ UBE3A في كل من الذكور فرداني الزيجوت (- / ذ) والإناث متخالف (- / +) الدماغ مقارنة مع من النوع البري (بالوزن، + / y و + / +) الضوابط littermate لكلا Mecp2 TM1 .1Bird وMecp2 tm1.1Jae السلالات. يوضح الرسم البياني النتائج GAPDH تطبيع مجتمعة (يعني ± SEM، الكميات كما هو موضح سابقا (32)، ونسب المثال أدناه كل حارة) من ثمانية مختلفة - / + وستة عينات مختلفة + / + الدماغ من Mecp2 tm1.1Bird وMecp2 TM1 سلالات .1Jae. * P <0.05، **** P <0.0001 التي كتبها t -test.

مستوى Ube3a التعبير أقل في Mecp2 نقص دماغ الفأر دون إجراء أي تعديلات في مطبوع التعبير الجيني

كما يرتبط التعبير الأمهات من Ube3a في الخلايا العصبية بعد الولادة مع التعبير الأب من محضر العقاقير Ube3a من منطقة السيطرة يطبع (ICR) من المروج Snrpn / Snurf (33)، درسنا دور MeCP2 عن حالة يطبع من هذا مكان. أظهر مناعي لونين (رقاقة) أن MeCP2 كان لا بد أن مروجي Snrpn ومراقبة إيجابية U2af1-RS1 (34) في المخ الماوس (الشكل 2 A). في المقابل، وجد أيا من Ube3a ولا Gabrb3 المروج لتترافق مع MeCP2 على مستوى كشفها، بما يتفق مع عدم وجود الحامض. تظاهر F1 ذرية التعبير الأمهات تفضيلية المتوقع من Ube3a الشعور نص والتعبير الأب من العقاقير Ube3a وSnrpn والتعبير biallelic من Gabrb3، بغض النظر عن Mecp2 النمط الجيني (الشكل - تحليلات أليل معين من (/ + × PWK Mecp2) 2 B). وأظهرت هذه النتائج أن انخفاض تعبير عن UBE3A / Ube3a في Mecp2 الدماغ نقص لم يكن مباشرة بسبب تغييرات في التعبير أليل معين وتؤكد نتائج مماثلة من الدماغ البشري (31). تم اختبار اثنين من الجينات مطبوع إضافية من مواضع أخرى (Rasgrf1 وH19) أيضا لإجراء تغييرات تعبير أليل معين في Mecp2 الفئران -null مع نتائج مماثلة (الشكل 2 B). تثبت هذه النتائج كذلك أن Mecp2 غير مطلوب لصيانة مطبوع التعبير الجيني.

يحلل الشكل 2. يطبع والنسخي في مخ الفأر. (A) لونين من عينات الماوس مخ الكبار [C57B6، PWK أو (B6 × PWK) F1] تم عزله عن رقاقة. كان يستخدم لمكافحة MeCP2 (C-النهائي) لimmunoprecipitate شظايا الحمض النووي من "المدخلات" السيطرة. Ube3a وGabrb3 المروجين لم يتم الكشف في مكافحة MeCP2 عجل لونين، وعلى النقيض من تسلسل المروج Snrpn التي أظهرت بالتعاون مع MeCP2. U2af1- كان RS1 تحكم إيجابية للمروج أثبتنا سابقا لربط MeCP2 في الدماغ (34). (B) Mecp2 tm1.1Bird / + تم عبرت (B6) إناث مع WT PWK الذكور للحصول على F1 الفئران متخالف لتعدد الأشكال النووية المنفردة في مناطق ترميز العديد من الجينات مطبوع. تم إجراء RT-PCR تليها الهضم انزيم التقييد (+) على الحمض النووي الريبي من عينات الدماغ الكبار من جميع الأنماط الجينية Mecp2 وكذلك عينات B6 وPWK الأبوية (P، الأب، M، الأم). كما ذكرت سابقا لوزن (B6 × PWK) F1 الدماغ (67)، Ube3a الشعور عرضت تفضيلية التعبير الأمهات، Ube3a العقاقير وSnrpn كان الأب حصرا وكان Gabrb3 biallelic، مع عدم وجود تأثير كبير من Mecp2 الوراثي على هذه بصمات. بالإضافة إلى ذلك، أظهرت Rasgrf1 تفضيلية التعبير الأب (68)، في حين أظهرت H19 التعبير الأمهات الحصري (70) في جميع العينات. النتائج هي ممثل من الكبار وعينات F1 الدماغ حديثي الولادة. وقد استخدم (C) TAQMAN PCR لتحديد الكمية مستويات التعبير عن Ube3a، Snrpn وGabrb3 في Mecp2 عمره 10 أسابيع - / ص وMecp2 + / Y RNA الدماغ. الاشعال امتدت حدود إنترون / اكسون ومحددة للنسخة الشعور Ube3a. النتائج المعروضة هي لمتوسط ​​± SEM من أربعة مكررات التجريبية من اثنين من الفئران في التركيب الوراثي. على الرغم من Ube3a وGabrb3 أظهرت انخفاض مستمر التعبير في الدماغ -deficient Mecp2 مقارنة مع الضوابط، لم يتغير Snrpn بشكل ملحوظ. تم الكشف عن (D) العقل والعقاقير محاضر Ube3a من قبل مضان في الموقع التهجين باستخدام riboprobes واحدة الذين تقطعت بهم السبل وquantitated التي كتبها LSC كما هو موضح سابقا (16). النتائج (يعني ± SEM من 3 بالوزن و 10 Mecp2 - / + عينات) وتم تطبيع للسيطرة على التحقيق β-الأكتين. * P <0.05 *** P <0.001 كتبها t -test.

لتحديد ما إذا خفضت أيضا مستويات Ube3a نسخة، تم تنفيذ TAQMAN PCR RNA على عينات تم الحصول عليها من Mecp2 - / ص وMecp2 + / الفئران ذ. أظهرت النتائج انخفاضا في Ube3a (الشعور) وGabrb3 النصوص، ولكن ليس في Snrpn، في Mecp2 الدماغ تعاني من نقص (الشكل 2 C). ثم تم إجراء مضان التهجين الموضعي مع riboprobes الذين تقطعت بهم السبل واحدة في يوم ميكروأري الأنسجة من أجل تحليل منفصل بمعنى والعقاقير محاضر Ube3a والتأكد من الحد من Ube3a الشعور نسخة من طريقة أخرى. الشكل 2 يوضح D النتائج تدل تعبير أقل بكثير من الشعور Ube3a ولكن ليس Ube3a النصوص العقاقير. وتشير هذه النتائج مجتمعة أن الانخفاض في UBE3A تعبير البروتين في الدماغ Mecp2 نقص يرجع إلى انخفاض التعبير عن نسخة الشعور Ube3a دون تغيير كبير في Snrpn أو نص العقاقير Ube3a أو التعبير الأم ومنحازة للUbe3a.

UBE3A التعبير هو نقص في RTT، AS وعينات الدماغية مرض التوحد

لتحديد ما إذا لوحظت تخفيضات كبيرة في UBE3A التعبير أيضا في عينات الدماغ البشري، وصف بعد الوفاة ميكروأري أنسجة المخ التي تحتوي على عينات سبق الدماغية الإنسان (16) وتحليلها من قبل المناعي وLSC. رسوم بيانية في الشكل 3 A تثبت تخفيضات كبيرة في UBE3A التعبير عن RTT، AS وعينات التوحد (أسود) مقارنة مع العمر كعينة ضابطة (الرمادي). وترد الأعمار من كل عينة، ولكن لم يلاحظ أي فروق ذات دلالة إحصائية في مستوى UBE3A التعبير مع زيادة العمر للضوابط (لا تظهر البيانات)، خلافا للزيادة مذهلة مع التقدم في السن لوحظت في MeCP2 (16، 35). يعني UBE3A مضان وتطبيع للسيطرة هيستون H1 التعبير ورسوم بيانية (الشكل 3 B)، مما يدل على تخفيضات كبيرة في UBE3A RTT وعينات من مرض التوحد. وكان من المتوقع وبما يتفق مع مستوى منخفض من الأب التعبير UBE3A في القشرة المخية (التعبير انخفاض UBE3A في AS 15q11-Q13 عينة حذف 36). تم تأكيد النتائج الخاصة بمركز حلول Lexmark من قبل طخة مناعية (الشكل 3 C يدل على وصمة عار تمثيلية). علاوة على ذلك، أظهرت انخفاض التعبير UBE3A في AUT1174 أيضا طخة مناعية في تقرير صدر مؤخرا (37).

الشكل 3. الكميات من UBE3A التعبير في ريت، Angelman والتوحد الدماغ العينات. (A) ميكروأري الأنسجة البشرية هو موضح سابقا (16) التي تحتوي على طبقات القشرة الأمامية III-V من منطقة Brodman (BA9) تم تحليلها لUBE3A التعبير LSC. تظهر رسوم بيانية التعبير السفلي من عينات المرضى (أسود) من ريت (RTT)، Angelman (AS) والتوحد (AUT) مقارنة مع العمر كعينة ضابطة (الرمادي). وكانت (B) القيم المناعي UBE3A طبيعية لتلك السيطرة هيستون H1 و نتائج أربع شرائح تكرار باستخدام اثنين مختلفة أضداد UBE3A (الانجذاب Bioreagents وBD العلوم البيولوجية) وبلغ متوسط ​​(يعني ± SEM) لكل عينة الدماغ هو مبين في (A ) (ن، وعدد من عينات مختلفة). انخفض (C) تحليل طخة مناعية التعبير UBE3A (مكافحة UBE3A، تقارب، مع الاعتراف كل إيسفورمس معروفة) أكد التعبير في AS، RTT وAUT مقارنة مع الضوابط (تظهر نسب UBE3A / GAPDH). * P <0.05، ** P <0.01 كتبها t -test.

ويلاحظ عيوب التعبير GABRB3 في Mecp2 الماوس نقص وRTT، AS والدماغ البشري التوحد

وقد GABRB3 متورطين بقوة في التوحد في عدة دراسات تكوين الجمعيات (14، 38، 39)، ولكن التغيرات في مستوى التعبير ولم يثبت سابقا. بسبب نقص Mecp2 تتأثر ليس فقط التعبير Ube3a ولكن أيضا الجين أعرب biallelically، Gabrb3 (الشكل 2 C)، ونحن التحقيق مزيد من المنتجات البروتين، حمض الغاما غاما (GABA) مستقبلات β3 الوحيدات، عن عيوب في Mecp2 / MeCP2 الدماغ تعاني من نقص. طخة مناعية التحليلات أثبتت مخفضة GABRB3 التعبير في Mecp2 - / + وMecp2 - / الدماغ ذ الماوس مقارنة مع الضوابط (الشكل 4 أ)، مما يشير إلى هدف إضافي من مكان 15q11-Q13 يمكن أيضا dysregulated في RTT، AS والتوحد.

الشكل 4. تحليل GABRB3 التعبير في الماوس والدماغ البشري. (A) تحليل طخة مناعية من GABRB3 التعبير (المضادة للGABRB3، الانجذاب Bioreagents، مع الاعتراف كل إيسفورمس معروفة) يظهر انخفاض التعبير في Mecp2 - / + وMecp2 - / ص الماوس الكبار الدماغ مقارنة مع الضوابط. جنبا إلى جنب النتائج GAPDH تطبيع من ثمانية Mecp2 مختلفة - / + وستة عينات مختلفة الدماغ Mecp2 + / + الكبار من Mecp2 tm1.1Bird وMecp2 tm1.1Jae سلالات كانت أقل بكثير من النوع البري الضوابط (P <0.01). يحلل (B) طخة مناعية الممثل من GABRB3 وGAPDH في AS، RTT والتوحد والتحكم (NS) عينات الدماغية مع نسب GABRB3 / GAPDH مبين. وأظهرت النتائج تكرار طخة مناعية لجميع العينات والاختبارات أهمية في الجدول 1. يتم توفير معلومات إضافية حول عينات المخ بعد الوفاة المستخدمة في هذه الدراسات على الانترنت (المواد التكميلية، الجدول S1).

كما بروتين الغشاء، كان GABRB3 أقل قابلية للتحليل LSC من البروتينات النووية أو حشوية ليتم تحديد الخلايا الفردية التي الكنتوري النووي. تحليلات طخة مناعية وبالتالي، يقوم على تجميد أمامي قشرة الدماغ، منطقة Brodman 9 (BA9)، من ما مجموعه ثلاثة RTT (مع الطفرات MECP2)، وهما AS (مع حذف 15q11-Q13)، وتسعة التوحد (أي الطفرات MECP2 اكتشافها أو الازدواجية 15q11-Q13) و 11 المطابقة العمرية المختلفة الضوابط العادية. وترد اثنين immunoblots تمثيلي في الشكل 4 B. الجدول 1 تظهر البيانات المجمعة لنسب GABRB3 / GAPDH طبيعية لجميع العينات الفردية. عندما تحليلها كما الفئات مجتمعة، RTT، وأظهرت عينات AS والتوحد أقل بكثير التعبير GABRB3 مقارنة مع الضوابط. وأظهرت عينات التوحد أعلى انخفاض كبير في GABRB3 كمجموعة (P <0.0001) على الرغم من التباين العالي بين العينات، مع إظهار بعض التعبير منخفضة للغاية (أي 797، 1174، 967 و5173، مع 5-10٪ من السيطرة التعبير) والبعض الآخر يظهر تغيير يذكر (أي 3924 و 5342، الشكل 4 B والجدول 1). وتظهر أعمارهم بين العينات في الجدول ولكن تكشف أي تغيير كبير في GABRB3 التعبير مع التقدم في السن من العينات السيطرة اختبارها. متوسط ​​التعبير GABRB3 لكل فئة المرضى، لذلك، مثلت أيضا كمجموعة لالمقارنات الإحصائية. على الرغم من أوجه القصور التعبير GABRB3 ليست عالمية في جميع العينات التوحد الدماغ، والعيوب هي أكثر أهمية مما كانت عليه في RTT وAS وتحدث في تردد عال بشكل غير متوقع (5/9 أو 56٪). تم اختبار خصوصية العيوب GABRB3 إلى AS، RTT والتوحد عن طريق تحليل ثلاث متلازمة داون (DS) عينات الدماغ مع التثلث الصبغي 21. الجدول 1 يبين عدم وجود عيوب كبيرة في GABRB3 التعبير في DS مقارنة مع الضوابط. هذه النتائج، وبالتالي، تثبت أن المنخفض GABRB3 التعبير هو سمة مشتركة من RTT والتوحد الدماغ.

الجدول 1.
فروق ذات دلالة إحصائية في التعبير GABRB3 في RTT، AS والتوحد الدماغ عن طريق طخة مناعية الكمي

نقاش

وقد كشف الأساس الجيني للمرض التوحد تحديا بسبب المسببات المعقد. على الرغم من أن التوريث التوحد في الأسر مرتفع، ويتوقع العديد من مواضع الجينات والتأثيرات البيئية (1). حتى بالنسبة لاضطرابات التوحد مع أسباب وراثية معروفة، ليست مفهومة جيدا المرضية الجزيئية. بسبب التداخل في النمط الظاهري بين RTT، AS والتوحد (4)، ونحن اختبار الفرضية القائلة بأن التعبير الجيني في المنطقة 15q11-Q13 يجوز تغيير في جميع المتلازمات الثلاث. نعرض لأول مرة أن AS الجينات، UBE3A / Ube3a، وانخفاض كبير في RTT وMecp2 الفئران -null، مما يدل على أن MECP2 / أسباب نقص Mecp2 انخفاض التعبير عن Ube3a / UBE3A. وبالإضافة إلى ذلك، علينا أن نظهر نقص UBE3A في عينات الدماغ التوحد، بما يتفق مع تقرير صدر مؤخرا (37). وعلاوة على ذلك، وتبين لنا أيضا لأوجه القصور لأول مرة في التعبير عن مستقبلات GABA β3 الجينات الوحيدات (GABRB3) في RTT والتوحد الدماغ وMecp2 الفئران -null.
وقد لوحظ الازدواجية الأمهات في 15q11-Q13 في ~1٪ من حالات التوحد كما الشذوذ الوراثي الخلوي الأكثر شيوعا في مرض التوحد (11). وقد حددت الدراسات الربط الجينوم على نطاق موضع 15q11-Q13 في بعض وليس كل بالاشعة (40 - 43). وعلاوة على ذلك، حددت بالاشعة عالية الدقة الربط داخل 15q11-Q13 في أسر التوحد الربط كبيرا لUBE3A وGABRB3 في بعض الدراسات ولكن ليس غيرها (14، 44 - +48). في حين أن الربط بين مرض التوحد إلى 15q11-Q13 قد يكون المتنازع عليها إلى حد ما على المستوى الجيني، وهنا تبين لنا أن العيوب مستوى التعبير عن اثنين من الجينات داخل 15q11-Q13 شائعة إلى RTT، AS والتوحد. وكان من المتوقع بسبب الأمهات حذف 15q11-Q13 في هذه العينات الحد من UBE3A وGABRB3 في AS المخ. ومن المثير للاهتمام، وأظهرت لا Ube3a ناقصة ولا أحد الأبوين الفئران disomy دليل على انخفاض Gabrb3 التعبير (49، 50)، ولكن عدم وجود AS عينات الدماغ مع أحد الأبوين أو disomy UBE3A الطفرات منعت تأكيد لدينا من هذه النتيجة في العينات البشرية.
نتائجنا تتفق مع عرض تقرير صدر مؤخرا انخفاض UBE3A في التوحد الدماغ (37)، ولكن تمتد المراقبة إلى إظهار نقص GABRB3 وجود عيب شائع في مرض التوحد. وGABA A جينات مستقبلة هي الجينات المرشحة جذابة للتوحد عدة عن دراسات أثبتت الربط إلى واحد أو أكثر من هذه الجينات (13، 14، 48). وقد أظهر تصوير الإشعاع الذاتي خفض GABA A ملزمة في التوحد الدماغ (51) وارتقى تعميم مستويات GABA تم العثور عليها في الأطفال المصابين بالتوحد (52 - +54). على الرغم من أن لدينا حجم العينة كان صغيرا بسبب اشتراط بعد الوفاة أنسجة المخ الإنسان، وتواتر UBE3A وGABRB3 التعبير العيوب داخل عينات التوحد الدماغ أعلى بكثير من العيوب الوراثية التي سبق وصفها. كانت العيوب في UBE3A وGABRB3 التعبيرات غير المرجح أن ذلك يعود إلى تدهور في الأنسجة بعد الوفاة لأنها لم تراع في العديد من أجهزة التحكم العادية وDS ولأن النتائج كانت كل تطبيع مع الضوابط التدبير المنزلي الجينات. وتشير هذه النتائج إلى أن انخفاض تعبير عن UBE3A وGABRB3 هي مرتبطة ويمكن أن يكون نتيجة المصب من مسببات وراثية أو جينية مختلفة متعددة. ومن المتوقع أن تكون أقل حدة من طفرة جينية (طفرات UBE3A في AS) أو nullisomy نتيجة المظهرية لخفض التعبير عن هذه الجينات. كلا Ube3a - / + وGabrb3 +/-، - / - الفئران لديها التعلم والسيارات العيوب والمضبوطات محرض، على غرار AS وبعض حالات التوحد (55، 56). في حين يبدو لنا التوحد العينة الدماغ لتخصيبه إلى حد ما لاضطرابات الاستيلاء المرتبطة بها (المواد التكميلية، الجدول S1)، بشكل ملحوظ وقد لوحظ انخفاض-GABRB3 التعبير في عينات الدماغ من الأفراد مع وبدون المضبوطات.
كما يمكننا التعرف على الجينات المرتبطة X، MECP2، وسبب وراثي واحد من UBE3A وGABRB3 التعبير عيوب في المخ لدى الثدييات. وقد استخدمنا سلالتين Mecp2 نقص RTT الماوس (23، 24) لإثبات أن UBE3A / Ube3a وGABRB3 / Gabrb3 وانخفضت بشكل ملحوظ في الكبار مخ الفأر مقارنة مع الضوابط WT. وعلاوة على ذلك، وتبين لنا عيوب كبيرة في التعبير عن UBE3A وGABRB3 في الإنسان عينات الدماغ RTT مع الطفرات MECP2. نتائجنا تتفق مع GABRB3 تبين انخفاض التعبير في RTT الدماغ عن طريق التعبير الجينوم على نطاق التنميط في تقرير واحد (27). لاحظت بعض التغييرات الطفيفة نسبيا في التعبير عن UBE3A وGABRB3 في هذه الدراسة قد يفسر لماذا لم يتم تحديد هذه الجينات في الدراسات التنميط الجينوم على نطاق أخرى من أنسجة متحولة MECP2 / Mecp2 (26، 28). كما لوحظ مراقبة أسفل التنظيم فضلا عن ما يصل التنظيم من الجينات المستهدفة MeCP2 في التعبير التنميط دراسات، يجادل ضد دور واحد لMeCP2 باعتباره قامع النسخي.
كما أننا أثبتنا سابقا العيوب MECP2 التعبير في نفس العينات التوحد الدماغ (16)، وربما عيوب التعبير MECP2 يمكن أن تكون مسؤولة عن أقل UBE3A وGABRB3 التعبيرات في هؤلاء الأفراد الذين يعانون من التوحد دون عيوب وراثية تتميز. بدلا من ذلك، قد عيوب في التعبير عن كل الجينات الثلاثة يكون نتيجة المصب من نمو المخ غير طبيعية. كما تبين أن Mecp2 308 / ص نموذج RTT الماوس لإظهار بعض السلوكيات التوحد، بما في ذلك stereopathies forepaw وتجنب الاجتماعي (7، 25)، ودور MeCP2 في التسبب في بعض الحالات على الأقل من التوحد يبدو من المرجح (4).
في هذا التقرير، ونحن أيضا البدء في كشف آلية بدلا المعقدة وغير المتوقعة التي MeCP2 ينظم التعبير عن UBE3A وGABRB3. على الرغم من MeCP2 يربط الحمض النووي الميثيلي وهو قامع النسخي وتوقع (17، 18)، وليس مطلوبا للحفاظ على بصمات الوالدين (31). هنا، علينا أن نبرهن على MeCP2 يربط على مجلس النواب في المروج Snrpn، ولكن ليس هو مطلوب منها لإسكات أليل الأمهات من Snrpn وUbe3a العقاقير أو أليل الأب من النص المعنى Ube3a. وعلاوة على ذلك، يتأثر مستوى التعبير عن Gabrb3 على الرغم من هذا الجين وأعرب عن biallelically. نحن أيضا إظهار صيانة التعبير الأمهات الحصري لH19 في Mecp2 الفئران -null على الرغم من وصفه بأنه "حسن النية" الهدف MeCP2 الجين (21). وتشير هذه النتائج إلى أن تأثير MeCP2 ملزمة لمجلس النواب هو أكثر تعقيدا من مجرد قمع الجينات مطبوع في رابطة الدول المستقلة وبدلا من ذلك قد تنطوي على المدى الطويل لونين التفاعلات. ربما تشكيل حلقة لونين مثل وقد تجلى مؤخرا في مطبوع المنطقة Igf2 / H19 (57) يتأثر سلبا بسبب نقص Mecp2، كما MeCP2 وقد وصفت في وقت سابق أن يكون النشاط ملزم مصفوفة (58). يتضمن ~1 المنطقة ميغابايت من UBE3A إلى GABRB3 أيضا عدة جينات صغيرة نويي RNA (33، 59، 60) وATP10A (61، 62)، واثنين من مستقبلات GABA A أخرى (GABRA5 وGABRG3) telomeric تقع من GABRB3 (63) أن كما يمكن dysregulated عن نقص MeCP2. بالإضافة إلى الجزر الدليل السياسي الشامل ثلاثة التحقيق هنا للجمعية مع MeCP2، وهناك 13 جزيرة الدليل السياسي الشامل الأخرى في هذه المنطقة التي لا يزال يتعين التحقيق كمواقع ملزمة MeCP2 المحتملة (UCSC الجينوم متصفح، مايو 2004 التجميع). بالإضافة إلى طويلة المدى المنظمة لونين المحتملة في رابطة الدول المستقلة، وقد أثبتت 15q11-Q13 التفاعلات العابرة مثلي في الخلايا الليمفاوية الإنسان (64) والدماغ (تاتشر وآخرون، المقدمة للنشر) وخلايا فأر ES (65) التي قد تكون مهمة في تنظيم مستوى التعبير عن جينات متعددة. على الرغم من أن الأفراد الذين يعانون من التوحد مع الازدواجية 15q11-Q13 قد تنبأ للتعبير عن مستويات أعلى من UBE3A وGABRB3 مقارنة مع الضوابط، ويمكن عدم وجود السليم الاقتران مثلي متحدر من والدين يؤدي بدلا من ذلك في التعبير السفلي من هذه الجينات مماثلة لعينات الدماغ التوحد في دراستنا.
في الختام، في هذا التقرير، أحرزنا اتصال هام من خلال الكشف على تغيير الدماغ الجزيئي مشترك لثلاثة التوحد اضطرابات النمو العصبي مختلفة من مسببات وراثية مختلفة. لاحظت عيوب التعبير في UBE3A وGABRB3 في RTT والتوحد المخ من المرجح أن تكون العواقب وظيفة الخلايا العصبية غير طبيعية نتيجة لقصور في MECP2 أو أسباب وراثية أو بيئية أخرى. مزيد من فهم كيف ينظم MeCP2 التعبير عن هذه الجينات وغيرها داخل 15q11-Q13 قد تساعد في تحديد أسباب وراثية لمرض التوحد والمساعدة في تصميم علاجات لجميع الاضطرابات الثلاثة.

المواد والأساليب

التحليل المناعي للميكروأرس الأنسجة

بناء ميكروأرس الأنسجة المستخدمة في هذه الدراسة تم الموصوفة سابقا لMecp2 الماوس -null (32) والاضطرابات العصبية النمائية الإنسان (16). لفترة وجيزة، لمجموعة الماوس، ثلاث نسخ أزيلت 600 ميكرون النوى من القشرة الدماغية من خمسة Mecp2 tm1.1Bird / +، خمسة Mecp2 tm1.1Jae / +، وثلاثة Mecp2 + / + الضوابط (P20 P27-ث ث)؛ واحد Mecp2 tm1.1Bird / ص، وMecp2 واحد + / تتزاحم ص (P10 ث)؛ واحد Mecp2 tm1.1Jae / ص واحد Mecp2 + / ص الضوابط littermate (P10 ث). يحتوي ميكروأري الأنسجة البشرية أمامي ثلاث نسخ القشرة المخية (BA9، طبقات III-V) التي تم الحصول عليها المجمدة <30 ساعة بعد الوفاة. تم تجهيز 5 ميكرون قسم للالمناعي كما هو موضح سابقا لمكافحة MeCP2 (C-المحطة، الانجذاب Bioreagents) وH1 المضادة للهيستون (ريف التكنولوجيا الحيوية) الأجسام المضادة (66). لأنسجة الماوس، تم تنفيذ تلطيخ جنبا إلى جنب مع الأجسام المضادة لمكافحة UBE3A (BD العلوم البيولوجية وهدية وحيدة النسيلة من هاولي، كلية الطب بجامعة هارفارد) والماعز المضادة للماوس مفتش سلسلة الأزرق المسمى (المسابر الجزيئية). لأنسجة الإنسان، تم استخدام الأجسام المضادة لمكافحة UBE3A (الانجذاب Bioreagents). تم إجراء التحليل LSC من MeCP2 السكان السلبية والإيجابية كما هو موضح سابقا (32).

في تحليل الموقع التهجين لميكروأرس الأنسجة

تم الكشف عن المعنى والعقاقير محاضر Ube3a من قبل مضان في الموقع التهجين باستخدام riboprobes الذين تقطعت بهم السبل واحدة من 796 سنة مضت المستنسخة جزء يمتد الإكسونات 10/06 (الاشعال، 5'-tcacatatgatgaagctacgaa-3 "و5'-ttctttgcttgaatattccgg-3 ') المسمى مع البيوتين (مختبرات Lofstrand). A digoxigenin تحقيق السيطرة β-أكتين المسمى (روش) والمهجنة في وقت واحد في 55 ° C. تم تنفيذ الشروط التهجين والكشف الفلوري والكميات التي LSC كما هو موضح سابقا (16).

تحليلات طخة مناعية

تم تحليل ما مجموعه 10 ميكروغرام من استخراج البروتين من كامل دماغ الفأر الكبار في حارة بواسطة طخة مناعية كما هو موضح سابقا (32) باستخدام مكافحة UBE3A (BD العلوم البيولوجية)، ومكافحة GABRB3 (الانجذاب Bioreagents) أو معاداة GAPDH (متقدم مناعى) الأجسام المضادة بتركيزات الموصى بها. تم عزل مقتطفات من البروتين من القشرة المتجمدة الإنسان بعد الوفاة الدماغية (BA9) من عينات هو موضح سابقا (16) وعينات إضافية (هارفارد البنك الدماغ وجامعة ميريلاند الدماغ والأنسجة بنك). مماثلة لعينات الماوس، تم تحليل 10 ميكروغرام من البروتين البشري في حارة مع نفس الكواشف باستثناء الاستعاضة عن الأجسام المضادة لمكافحة UBE3A محددة البشرية (الانجذاب Bioreagents). وقد تم الحصول على المخية (BA9) عينات بشرية إضافية من مرض التوحد، لتسقط وعينات ضبط نفس العمر من برنامج الأنسجة التوحد ليحلل طخة مناعية. تم تنفيذ الكميات باستخدام Nucleotech للجل الخبراء الإصدار 2.0.

التعبير أليلية من الجينات مطبوع في بين الأنواع الهجينة

Mecp2 tm1.1Bird / + (C57B6) إناث الفئران (23) وتزاوج الذكور PWK بالوزن وتم التنميط الجيني لالذريات الناتجة عن Mecp2 كما هو موضح سابقا (32). تم عزل الحمض النووي الريبي من الكبار (Mecp2 tm1.1Bird / + × PWK) عينات F1 الدماغ من جميع المورثات الأربعة وكذلك الفئران B6 وPWK الوالدين. تم إجراء RT-PCR تليها الانزيم تقييد الهضم كما هو موضح سابقا لUbe3a، Snrpn، Gabrb3 (67) وRasgrf1 (68). H19 الاشعال (5'-GAACCACTAACACTACCTGCC-3 "و5'-GGAACTGCTTCCAGACTAGG-3، 58 ° C مع 30 دورات) تضخيم شظية 585 شركة بريتيش بتروليوم التي تم هضمها مع BGL II.

مناعي لونين

لونين من الكبار الماوس المخ عينات [C57B6، PWK أو (B6 × PWK) F1] تم عزله عن رقاقة كما هو موضح سابقا (34، 69). كان يستخدم لمكافحة MeCP2 (C-النهائي) لimmunoprecipitate شظايا الحمض النووي من السيطرة "الإدخال" كما هو موضح سابقا لالاشعال تغطي 5 "الجزر الدليل السياسي الشامل لSnrpn ومراقبة إيجابية U2af1-RS1 (34)، Ube3a (5'-CCCTTCTGCTTCTCTTCGGAGT-3" ، 5'-CAGAAGCAGCACACGAATAAA-3، 58 ° C يصلب، 37 دورات) وGabrb3 (5'-CCTCAGAGCCACCCGTAC-3 "، 5'-GTCTAGGACCCCGCGACA-3، 60 ° C يصلب، 40 دورة).

TAQMAN PCR

يرد كل PCR 400 ن M من كل التمهيدي، 80 ن M لجنة التحقيق TAQMAN ومتاحة تجاريا PCR mastermix (TAQMAN العالمي PCR Mastermix، النظم البيولوجية التطبيقية) تحتوي على 10 م M تريس، حمض الهيدروكلوريك (الرقم الهيدروجيني 8.3)، 50 م M بوكل، 5 م M MgCl 2، 2،5 م M triphosphates deoxynucleotide، 0.625 U AmpliTaq الذهب DNA البلمرة في رد الفعل، 0.25 U AmpErase UNG في رد الفعل و 5 ميكرولتر من العينة كدنا] المخفف في الحجم النهائي من 25 ميكرولتر. Ube3a امتدت التمهيدي إلى الأمام الإكسونات 7-8 ( 5'-TCCAGATATTGGTATGTTCACATATG-3)، عكس التمهيدي (5'-GGGAAAATGGACATCCAGTATACAA-3 ') والتحقيق (' كانت) من اكسون 8 (NM_173010). 5'-CTGATTGGCATAGTCCTGGGTCTGGC-3 Snrpn التمهيدي إلى الأمام امتدت الإكسونات 3-4 (5 ' كانت -TCAGGAAGATCAAGCCAAAGAATG-3)، عكس التمهيدي (5'-AAGTTCTCCCCACGTAGCAAGAC-3 ') والتحقيق (5'-ACAGCCAGAACGTGAAGAAAAACGGGT-3') من اكسون 4 (NM_013670). Gabrb3 التمهيدي إلى الأمام امتدت الإكسونات 6-7 (5'-CCGTCTGGTCTCCAGGAATGTT -3 ')، عكس التمهيدي (5'-CCGATATTTCTCTTCAACCGAAAA-3') والتحقيق (كانت 5'-TTCGCCACAGGTGCCTATCCTCGAC-3 ') من اكسون 7. تم وضع العينات في 96 لوحات جيدة وتتضخم في التألق الآلي (ABI PRISM 7700 نظام تسلسل كشفها، النظم البيولوجية التطبيقية). كانت الظروف التضخيم 2 دقيقة في 50 ° C، مدة 10 دقيقة في درجة حرارة 95 درجة مئوية، و 40 دورات من 15 ثانية في 95 ° C و60 ثانية في 60 ° C. وقد تم تحديد الكميات النهائية باستخدام طريقة CT المقارن (النظم البيولوجية التطبيقية) والتقرير كما النسخ النسبي أو ن أضعاف الفرق نسبة إلى كدنا] تدريج (Mecp2 + / ص من كل زوج) بعد تطبيع لHPRT1 مراقبة التدبير المنزلي الجينات.

 

__________________
استشارى الادوية الطبيعيه وباحث وخبير فى علاجات التوحد
رد مع اقتباس
  #32  
قديم 12-06-2015, 06:34 PM
رافت ابراهيم رافت ابراهيم غير متواجد حالياً
عضو ذهبي
 
تاريخ التسجيل: Dec 2011
المشاركات: 520
افتراضي تغييرات في GABAergic المؤشرات الحيوية في الدماغ التوحد: نتائج البحوث والآثار السريرية

 

http://onlinelibrary.wiley.com/doi/1.../ar.21252/full



التوحد هو اضطراب النمو المتفشي تتميز تكرار السلوك النمطي، العجز الاجتماعي والعاطفي، والقدرات اللغوية تأخر أو تغيب. هناك neuropathologies المعروفة في الدماغ التوحد التي تؤثر الحوفي، المخيخ، والهياكل القشرية لكن ملف الكيميائية العصبية الأفراد المتضررين، وكشف في الدراسات الأنسجة بعد الوفاة، وإلا الناشئة مؤخرا. واحد العنصر الرئيسي الذي يظهر أثر كبير في مرض التوحد هو نظام GABAergic. فمن الواضح الآن أن هناك آثار كبيرة على نطاق واسع في العديد من المناطق الموزعة في الدماغ التوحد التي كشفت عنها الدراسات النسيجية، autoradiographic، والكيمياء الحيوية. مفتاح توليف الانزيمات لGABA، وحمض الجلوتاميك نوع كربوكسيل 65 و 67 (GAD65 وGAD67)، وانخفض في المخيخ وكشف فحص دقيق لمستويات مرنا أن ذلك يرجع إلى حد كبير إلى انخفاض في الخلايا العصبية وجزء من السكان من الخلايا العصبية المسنن أكبر ل تقاس في الدراسات التهجين الموضعي. كانت أنواع الخلايا الأخرى إما المستويات العادية GAD (خلايا جولجي، interneurons المسنن أصغر، والخلايا النجمية) أو زيادة مستويات (خلايا سلة). GABA كثافة مستقبلات، عدد، وتعبير البروتين وانخفضت جميع في المخيخ وفي المناطق القشرية مختارة. GABA A و B GABA البروتين الوحيدات التعبير انخفض بشكل كبير في المخيخ، خفضت مواقع الربط BA 9 و BA 40. البنزوديازيبين بشكل كبير في الحصين والقشرة الحزامية الأمامية (BA 24). مجتمعة، تشير البيانات من هذه الدراسات أن هناك ديسريغولاتيون ملحوظ في نظام GABA المثبطة في الدماغ التوحد التي تؤثر المؤشرات الحيوية معينة مترجمة إلى أنواع معينة من الخلايا والصفيحة من المحتمل التأثير على الدوائر والسلوك. عنات تم 2011. © 2011 ايلي ليس، شركة

هناك أدلة متزايدة على عصبية مرضية والكيميائية العصبية أن النظام GABAergic ديه مشاركة رئيسيا في مرض التوحد. من تحليل الأنسجة بعد الوفاة، وقد كان من المعروف منذ فترة طويلة أن هناك انخفاضا في عدد GABAergic الخلايا العصبية للدماغ لدى العديد من الأفراد المصابين بالتوحد (وليامز وآخرون، 1980؛ بومان وكمبر، 1985؛ Ritvo وآخرون، 1986؛ بيلي وآخرون، 1998؛ كمبر وبومان، 1998؛ ويتني وآخرون، 2008). في العقد الماضي، وقد كشفت الدراسات البيوكيميائية التي هناك انخفاض درجة عالية بشكل ملحوظ من مستويات أنزيمات توليف الرئيسية للGABA، وحمض الجلوتاميك نوع كربوكسيل 65 و 67 (GAD65 وGAD67 إيسفورمس) في المخيخ والجدارية القشرة في التوحد (فاطمي وآخرون، 2002) كذلك يشير إلى أن هناك تأثيرات على النظام GABA في المخيخ وأماكن أخرى في الدماغ التوحد. في توطين تشريحيا هذه التغييرات في المخيخ، قام ييب وزملاؤه سلسلة من في الموقع التهجين الدراسات النسيجية أن radiolabels وGAD65 أو GAD67 مرنا داخل أنواع الخلايا العصبية المحددة.

مستويات العصبية CELL GAD67 مرنا في الفص الخلفي للدماغ HEMISPHERE في التوحد ومراقبة أدمغة AS يقاس مع في الموقع التهجين تصوير الإشعاع الذاتي


في الدراسة الأولى، ييب وآخرون. (2007) أظهرت انخفاضا بنسبة 40٪ في GAD67 مرنا في الخلايا العصبية (أجهزة الكمبيوتر) في حالات التوحد ثمانية الكبار النسبي إلى ثمانية العمر والجنس، والفترة التالية للموت مطابقة الضوابط في نصف الكرة الأرضية الخلفية الجانبية للدماغ في منطقة الساق الثاني (كتل المتخذة أقل شأنا من fissue الأفقي في الفص الخلفي). كان هذا الاختلاف في مستويات GAD67 مرنا موجودة في أجهزة الكمبيوتر من حالات التوحد المتبقية مع الأرقام انخفضت من أجهزة الكمبيوتر، وكذلك في حالات التوحد التي كانت تكملة طبيعية من أجهزة الكمبيوتر. وهكذا، على الرغم من الدراسات عصبية مرضية تحديد مجموعات فرعية من حالات التوحد مع أجهزة الكمبيوتر انخفض، تم العثور على خفض GAD67 مرنا في كل حالة التوحد التي شملتها الدراسة. اقترح نتائج هذه الدراسة أيضا أن أجهزة الكمبيوتر هم عرضة بوجه خاص في الدماغ التوحد و، أن هناك احتمال لحدوث اضطراب كبير في الدوائر المخيخ داخل الفص الخلفي.

الكثافة العادية من مخيخي INTERNEURONS في الساق II الإقليم في حالات التوحد


في الآونة الأخيرة، ويتني وآخرون. (2009) تنفيذ عملية العد stereological سلة الخلية (BC) والخلايا النجمية interneurons (SC) GABAergic في الطبقة الجزيئية للالخلفي الجانبي قشرة المخ في نفس الموقع مفصص حيث تم إجراء دراسات في الموقع. وأظهرت نتائج الدراسة أنه لا يوجد اختلاف كبير في الكثافة النسبية إما سلة أو الخلايا النجمية بين حالات السيطرة والتوحد الرغم من وجود خسارة PC معتدلة أو شديدة في 3/6 حالات التوحد في الدراسة. وبالتالي، فإنه لا يهم ما إذا كان هناك انخفاض في أجهزة الكمبيوتر أم لا، يبدو أن كثافة هذه interneurons تتأثر.

GAD67 مرنا التغيرات في مخيخي INTERNEURONS في حالات التوحد هي عكس ذلك من الخلايا العصبية


في تناقض ملحوظ مع انخفاض مستويات GAD67 مرنا في الخلايا العصبية في حالات التوحد الكبار، في نفس الحالات كان هناك مستويات مرتفعة بشكل ملحوظ GAD67 مرنا في الخلايا سلة، وكان هناك اتجاه لزيادة مستويات في GAD67 مرنا في الخلايا النجمية مقارنة مع العمر و ضوابط يقابل فترة بعد الوفاة. وكانت هذه النتائج مثيرة للدهشة منذ فاطمي وآخرون. (2002) أظهرت انخفاضا عاما بنسبة 50٪ في مستويات GAD في المخيخ في تشريح عينات الأنسجة التوحد.

مستويات BASKET CELL GAD67 مرنا في التوحد ومراقبة أدمغة


في ثاني دراسة في الموقع، ييب وآخرون. (2008) بقياس مستويات GAD67 مرنا في نوعين من interneurons المخيخ، BCS والمنبوذة في طبقة الجزيئية من الساق الثاني من نفس 16 التوحد ومراقبة الحالات التي تم فحصها في الدراسة PC مرنا. كما كلا النوعين من interneurons أجهزة الكمبيوتر يعصب (أي BCS إرسال المحاور الأفقية في الثلث السفلي من طبقة الجزيئية تشكيل محور عصبي "أعشاش" حول سوما من كل جهاز كمبيوتر في حين المنبوذة يعصب التشعبات PC في الجزء العلوي من ثلثي الطبقة الجزيئية)، فإنه كان ضروريا لتحديد ما إذا كان بالانزعاج أيضا تعديل المثبطة المحتملين من interneurons. في هذه الدراسة، كانت هناك زيادة كبيرة للغاية الإجمالية بنسبة 28٪ في المتوسط ​​التعبير GAD67 مرنا في الخلايا سلة في التوحد ثمانية مقارنة مع ثمانية العقول السيطرة (1.03 ± 0.05 التوحد، تسيطر 0.69 ± 0.05؛ ر = -4.615، DF = 14 ، P <0.0001، واثنين من الذيل، واختبار ليفين من أجل المساواة من التباين التجانس لم تظهر الفرق بين الفرق من السيطرة والتوحد المجموعات F = 0.061، P = 0.808). ومن الجدير بالذكر أن خلية سلة واحدة يعصب ما يصل إلى 10 أجهزة الكمبيوتر (بالاي وتشان بالاي، 1974) وكل BC ديه اتصال لBCS الأخرى التي يبدو أن يقترن electrotonically (مان-متزر وياروم، 1999)، وبالتالي فإنها تمارس تغييري قوي تأثير كابح بشكل خاص على أجهزة الكمبيوتر. ومن غير المعروف ما إذا كانت زيادة BC GAD67 مرنا يترجم إلى زيادة إطلاق سراح GABA إلى الأهداف أجهزة الكمبيوتر الخاصة بهم ولكن من المغري أن يتكهن أنه قد يكون في الواقع واحدة من التأثيرات التي تسبب انخفاض مستويات GAD67 مرنا في أجهزة الكمبيوتر مما أدى إلى انخفاض الإفراج GABA بواسطة أجهزة الكمبيوتر إلى الخلايا العصبية للدماغ النووية، في هذه الحالة، نواة المسنن وهذا هو الهدف من أجهزة الكمبيوتر من منطقة الساق II.

مستويات النجمية CELL GAD67 مرنا في التوحد ومراقبة أدمغة


كان هناك اتجاه نحو زيادة طفيفة في مستويات التعبير GAD67 مرنا بين حالات التوحد والتحكم في الخلايا النجمية التي فشلت في التوصل إلى دلالة إحصائية (يعني ± SEM بكسل من الحبوب الفضة / الخلايا العصبية، التوحد 0.88 ± 0.06، تسيطر 0.77 ± 0.04؛ P = 0.06، تي اختبار مستقل؛ ييب وآخرون، 2008). وكشف تحليل القوة ستكون هناك حاجة إلى حوالي 12 حالة لكل مجموعة للوصول إلى أهمية. ومن المرجح أن دراسة تكرار تنطوي على أكبر "ن" قد يؤدي إلى نتائج مشابهة لهذه البيانات قبل الميلاد. إذا كان هناك أيضا زيادة في مستويات GAD67 مرنا في اللجان الدائمة، وهذا يمكن زيادة تعزيز زيادة تأثير تغييري تمارس على أجهزة الكمبيوتر المتبقية ويحتمل أن تفاقم التأثيرات على الخلايا العصبية المسنن.

مستويات جولجي CELL GAD67 مرنا في التوحد ومراقبة أدمغة


تقدم جوهري نوع GABAergic جولجي II الخلايا العصبية المثبطة لإدخال الخلايا الحبيبية وألياف متوازية وبالتالي التأثير على وظيفة الخلايا العصبية. وعلى النقيض من مستويات GAD67 تغيير جدت في الخلايا العصبية وinterneurons، تم العثور على GAD67 مرنا من خلايا جولجي في الطبقة الحبيبية من حالات التوحد ثمانية الكبار مقابل سبع حالات من الأفراد المصابين بالتوحد لتكون مشابهة للمستويات في الحالات التحكم (بلات وآخرون آل.، 2010). هذا اكتشاف مهم لأنه يدل على أن في التوحد، مجموعات سكانية فرعية محددة من الخلايا العصبية للدماغ هي أكثر عرضة للتغيرات GABA من غيرها، وهي الملاحظة التي أكد كذلك عند تحليل subnuclei داخل المسنن موضح في المقطع التالي.

مستويات المسنن NEURON GAD65 مرنا في التوحد ومراقبة أدمغة


وقد تم تحديد عدد من القطعان المسنن متميزة في الحالات الإنسان على أساس تقديرات الشخصي المحمولة بما في ذلك تلك الموجودة في ~ 10 ميكرون، 15 ميكرون، 20 ميكرون، و 30 ميكرون في القطر (ييب وآخرون، 2009). من هذه، واثنين من مجموعات سكانية فرعية متميزة احتواء GAD65 مرنا: (1) (حوالي 20 ميكرون) GABAergic الخلايا المسنن الأكبر حجما هو موضح سابقا في الدراسات الحيوانية لمشروع مجمع الزيتونية السفلية (Graybiel وآخرون، 1974؛ تولبرت، 1978؛ Oertel وآخرون، 1981؛ سان سير وكورفيل، 1981؛ Mugnaini وOertel، 1985؛ دي زيو وآخرون، 1988، 1996، 1998، نيلسون وMugnaini، 1989؛ Ruigrok وVoogd، 1990؛ Fredette وMugnaini، 1991) و (2) أصغر (~ 10 ميكرون) GABAergic الخلايا العصبية المسنن التي إما أن تكون حصرا GABAergic أو ربما تحتوي أيضا على الجلايسين (تشن وهيلمان، 1993؛ Baurle وGrusser-Cornehls، 1997) ومشروع الخلايا العصبية المسنن الأخرى المذكورة سابقا في قرد (تشان بالاي، 1977).

في هذه الدراسة من مستويات GAD في الخلايا العصبية للدماغ، تظاهر الكميات من العلامات GAD65 مرنا تخفيض 51٪ في إشارة في أكبر حيوانية المسنن الحجم في المجموعة التوحد بالمقارنة مع مجموعة المراقبة (175.77 ± 19.60 السيطرة، 86.56 ± 17.40 التوحد؛ P = 0.009؛ ر اختبار مستقل، اختبار ليفين من أجل المساواة من التباين التجانس بين الفرق F = 0.464). والمثير للدهشة، ومع ذلك، كانت المستويات المتوسطة من GAD65 مرنا في حيوانية صغيرة خلية مماثلة بين المجموعتين (155.69 ± 22.69 السيطرة؛ 138.25 ± 21.06 التوحد؛ ر اختبار مستقل، اختبار ليفين من أجل المساواة من التباين التجانس بين الفرق F = 0.031، P = 0.594). A المراسلات بين GAD65 مرنا ومستويات البروتين GAD65 بما نوى المسنن ذكرت سابقا (كوفمان وآخرون، 1991؛ Escapalez وآخرون، 1993؛ مارتن، 1993). وفيما يتعلق أكبر حيوانية المسنن في هذه الدراسة، وانخفاض ملحوظ في مستويات GAD65 تشير إلى أن هناك انخفاض GABAergic مساهمة في مجمع الزيتونية السفلية (IOC) والتي قد تؤدي إلى التحفيز المفرط للخلايا العصبية اللجنة الاولمبية الدولية، وخاصة من الزيتون الرئيسي (PO ). منذ الخلايا العصبية الزيتونية السفلية تقترن electrotonically (على سبيل المثال، ويلز، 2002) وهذا قد يمثل المتغيرة استجابة السكان غير متزامن مع الآثار المحتملة على إطلاق أجهزة الكمبيوتر المستهدفة في نصف الكرة الغربي. اختلال الخلايا PO على طول حافة الشريط الزيتوني في بعض حالات التوحد (بومان وكمبر، 1985؛ Thevarkunnel وآخرون، 2006) قد تسهم أيضا في الاستجابات الفسيولوجية غير طبيعية. في المقابل، طبيعية مستويات GAD65 مرنا في حيوانية المسنن أصغر تستدل على أن الدوائر GABAergic المحلية داخل المسنن والحفاظ عليها.

ومن غير المعروف مع كل التغييرات في النظام GABA المخيخ في حالات التوحد حول ما إذا كان هناك عواقب إضافية في التوقعات النووية المخيخ إلى النواة الحمراء والمهاد، وبالتالي إلى القشرة المخية. فإنه يمثل طريقا محتملا واحد أو أكثر (ق) التي يمكن أن تؤثر على المحرك و / أو السلوكيات المعرفية لدى الأفراد الذين يعانون من التوحد. إلى تعقيد الأمور، يبدو أن الخلايا العصبية داخل نواة للدماغ أربعة يجوز بالانزعاج. في دراسة المنوية، بومان وكمبر (1985 صفها) وpalor ملحوظ في نيسل تلطيخ في كل من نوى أربعة. وهذا يشير إلى أن عدد إسقاط المحاور ترك المخيخ ويمكن أيضا أن تخفض مما أدى إلى تفاقم الدوائر المخيخ المضطربة.

GABA مستقبلات دراسات في الدماغ التوحد إثبات انخفضت بشكل ملحوظ فرعية في الحصين، المخيخ، والمناطق القشرية الدماغية في التوحد


أجريت الدراسات ملزمة يجند تركيز واحد الأولية في حصين ودراسة تجريبية على نحو فعال للكشف عدد من مختلف أنواع مرسل مستقبل من أربعة أنظمة رئيسية: 5-HT، الغلوتامات، GABA، والأستيل كولين (. بلات وآخرون، 2001) . والمثير للدهشة، وجدت نتائج هذه الدراسة أن معظم التدابير في حالات التوحد الكبار كانت في العادية مستويات كثافة مستقبلات بما في ذلك 5-HT1aR، 5-HT2R، المسكارينية نوع الكوليني 1 و 2 (M1، M2)، عالية تقارب الكولين مواقع امتصاص (HACU) ، kainate وNMDAR في جميع الحقول الفرعية الرئيسية للالحصين. كانت اثنين فقط التي لم تكن عند مستوياتها الطبيعية في الحقول الفرعية العليا ملزمة الحصين لمدة 3 [H] GABA A مستقبلات المسمى muscimol و 3 [H] الفلونيترازيبام المسمى البنزوديازيبين (BZD) مواقع الربط (على GABA A مستقبلات) التي أظهرت أهمية انخفاض في كثافة مستقبلات. دراسة متابعة من هذا المختبر، أظهرت كذلك أن 3 [H] الفلونيترازيبام المسمى خفض ملزم BZD في حالات التوحد يرجع إلى انخفاض في Bmax، أو عدد من المستقبلات ولا يرجع ذلك إلى دينار أو تقارب ملزمة الذي كان عند مستوياتها الطبيعية (غبتيل] وآخرون، 2007). دراسة حديثة من مختبرنا أظهرت أيضا أن هناك كثافة متزايدة من GABAergic interneurons قرن آمون المسمى مع أنواع معينة من الأجسام المضادة للبروتينات الكالسيوم ملزمة. لورنس وآخرون. (2010) وجدت زيادة انتقائية في interneurons-calbindin immunopositive في التلفيف المسنن، interneurons-parvalbumin immunopositive في CA1 CA3 والحقول الفرعية والخلايا العصبية calretinin immunopositive في CA1. هذا يتفق مع الملاحظات النوعية من بومان وكمبر (1985) أن الحصين أعطى مظهر بالارض مع الخلايا العصبية الصغيرة وزيادة كثافة التعبئة. مجتمعة، نستنتج هذه البيانات زادت كثافة الخلايا العصبية وinterneurons، تخفيض neuropil، و انخفض مستقبلات GABA في الحقول الفرعية اختر لكن الرئيسية التي يمكن أن تسهم مجتمعة في الدوائر المتغيرة الحصين synaptogenesis، و، وظيفة في نهاية المطاف.

في المخيخ، التي أنجزت مؤخرا (المادة قيد الإعداد) الدراسات التي Thevarkunnel وآخرون. وقد وجدت في حالات التوحد البالغين مقارنة مع الضوابط، انخفاض كبير في 3 [H] مواقع الفلونيترازيبام المسمى ملزمة BZD في طبقة الجزيئية وانخفاض 3 [H] المسمى muscimol GABA A المستقبلات في طبقة PC في الخلفية الجانبية نصف الكرة المخيخ. وتتلقى هذه المنطقة المخيخ توقعات الجبهي جسري (عبر طبقة الحبيبية)، وكذلك الألياف تسلق الزيتونية المخيخية من الزيتون الرئيسي. وتشير هذه الدراسات إلى أن GABA تظهر التغييرات مستقبلات لا تقتصر على الحصين و، أن هناك تغيير آخر في تنظيم متشابك GABAergic في المخيخ من المخ مرض التوحد.

وكانت السلسلة المقبلة من الدراسات ملزمة يجند في القشرة الدماغية، ووجدت انخفاضا من 46.8٪ في متوسط ​​الكثافة من 3 [H] المسمى muscimol GABA A المستقبلات في سطحية (طبقات supragranular I-III) وانخفاض قدره 20.2٪ في الكثافة المتوسطة في عميقة (طبقات infragranular V-VI) من القشرة الحزامية الأمامية (ACC) في المواضيع التوحد البالغين مقارنة مع الضوابط الملائمة (Oblak وآخرون، 2009). انخفاض مماثل كبير في طبقات supragranular (28.9٪)، وفي طبقات infragranular (16.4٪) لمدة 3 [H] مواقع الفلونيترازيبام المسمى BZD ملزم في نفس الحالات (Oblak وآخرون، 2009؛ الشكل 1) وقد تجلى أيضا . هذه النتائج تثبت أن التغييرات GABA على نطاق واسع في جميع أنحاء العديد من المناطق والمناطق في الدماغ التوحد مما يدل على أن التغيرات الكيميائية العصبية انتقائية وهامة قد تكمن وراء أمراض الأعصاب احظ فضلا عن المساهمة المرجح أن العجز الاجتماعي والعاطفي.

الشكل 1. 3 [H] مواقع الفلونيترازيبام المسمى BZD ملزمة في القشرة الحزامية الأمامية في قضية السيطرة مقارنة للفرد يعانون من مرض التوحد. وقد pseudocolored كثافة ملزمة لإظهار الاختلافات في ملزمة في الطبقات السطحية والعميقة. التسمية الحمراء إلى ارتفاع ملزمة والعلامة الصفراء وتمثل أقل ملزمة. في دراسة سبع حالات التوحد الكبار وتسع حالات السيطرة كان هناك انخفاض 28.9٪ في مواقع البنزوديازيبين ملزمة في حالات التوحد في الطبقات السطحية (الأحمر وصفت المنطقة) وانخفاض 16.4٪ في الطبقات القشرية العميقة (الأصفر المسمى المنطقة) مقارنة مع الضوابط (Oblak وآخرون، 2009).

الدراسات الحالية تحقق الجارية دور HT-5 وأنظمة الغلوتامات في هذه المناطق وكذلك تقديم الدراسات إلى المناطق القشرية إضافية. التغييرات في GABA A مستقبلات استخدام على الشريحة يجند تصوير الإشعاع الذاتي نفسها ملزمة لا توفر المعلومات المتعلقة بروتين تعبير من هذا النوع مستقبلات. في المقاطع التالية، الدراسات التي فاطمي وزملاؤه تعالج هذه القضية وتثبت أن بروتين تعبير الواقع لا تتبع التغييرات مستقبلات لكل من GABA A و B GABA المستقبلات في مجموعة متنوعة من الهياكل في الدماغ التوحد.

دراسات بروتين تعبير OF GABA A و B GABA مستقبلات باستخدام النشاف الغربية في المخيخ، برودمان AREA 9 و برودمان AREA 40 في أدمغة المصابين بالتوحد دواعي


في القسم السابق، ناقشنا التجارب تصوير الإشعاع الذاتي التعامل مع الترجمة مرنا وكثافة مستقبلات / الانتماءات لمختلف مستقبلات GABA في عدد من المواقع الدماغ في الموضوعات مع التوحد والضوابط الملائمة. في هذا الجزء من المقالة سوف نناقش التعريب، وعلى وجه التحديد، ودراسات البروتين التعبير عن GABA A وGABA B مستقبلات باستخدام التقنيات التقليدية البيوكيميائية من SDS-PAGE والغربية النشاف في مناطق المخ المختلفة من الموضوعات مع التوحد والضوابط الملائمة (فاطمي وآخرون .، 2009A، ب).

GABA A و B GABA مستقبلات البروتين التعبير في المخيخ


ومن المعروف جيدا أن تشوهات للدماغ في التوحد أكثر اتساعا من مناطق أخرى في الدماغ وتشمل فقدان الحبيبية والخلايا العصبية (Ritvo وآخرون، 1986؛ بومان وكمبر، 2005). وضمور في الخلايا العصبية (فاطمي وآخرون، 2002)، ويمكن أن تكون مسؤولة عن المحركات المرتبطة خلل في التوحد (Nayate وآخرون، 2005). هنا، قمنا بقياس مستويات الأربع GABA A مستقبلات (GABRα1، GABRα2، GABRα3، وGABRβ3) واثنين من GABA B مستقبلات (GABBR1 وGABBR2) (الشكل 2). تم تطبيع جميع القيم ضد الجينات التدبير المنزلي، β-الأكتين وأعرب كما نسب إلى بيتا الأكتين لتوفير قياس أكثر دقة من تغييرات محددة في مستويات GABA A وGABA B مستقبلات. كانت هناك تخفيضات 27-63٪ في نسب GABA A مستقبلات / β-الأكتين في مخيخات من الموضوعات مع التوحد (فاطمي وآخرون، 2009B). ومع ذلك، وصلت فقط GABRα1 وGABRβ3 دلالة إحصائية (P <0.007 وP <0.008 على التوالي؛ الجدول 1؛ فاطمي وآخرون، 2009B). في نسب الأنسجة نفسها من GABBR1 وGABBR2 مستقبلات / تم تخفيض β أكتين بشكل ملحوظ بنسبة 67٪ (P <0.0049) و 46٪ (P <0.026) على التوالي (الجدول 1؛ فاطمي وآخرون، 2009A). وهكذا، يبدو أن أربعة من أصل ستة مستقبلات GABA فحص وdownregulated بشكل كبير في جميع أنحاء مخيخات من الموضوعات مع التوحد.

الشكل 2. عينات التمثيلية للGABRα1 (51 كيلو دالتون)، GABRα2 ​​(51 كيلو دالتون)، GABRα3 (55 كيلو دالتون)، GABRβ3 (56 كيلو دالتون)، GABBR1 (108 كيلو دالتون)، GABBR2 (105 كيلو دالتون)، وβ-أكتين (42 كيلو دالتون) في BA9، BA40، والمخيخ من الموضوعات مع التوحد (A) والضوابط الملائمة (C). يتم طبع الصور لGABRα1، GABRα2، GABRα3، وGABRβ3 بعد الحصول على اذن من سبرنجر:: مذكرة مجلة للتوحد واضطرابات النمو، GABA A مستقبلات Downregulation في أدمغة من الموضوعات المصابين بالتوحد، وحجم 39، 2009، صفحة 226، فاطمي SH، Reutiman TJ، فولسوم TD، Thuras PD، الشكل 1. يتم طبع الصور لGABBR1، GABBR2، ومستويات البروتين β الأكتين بعد الحصول على اذن من سبرنجر: المخيخ، التعبير عن GABA (B) مستقبلات هو تغيير في العقول من الموضوعات المصابين بالتوحد، وحجم 8، 2009، صفحة 67، فاطمي SH، فولسوم TD، Reutiman TJ، Thuras PD، الشكل 1.

الجدول 1. التعبير عن GABRA1-GABRA3، GABRB3، GABBR1، وGABBR2 في المخيخ، BA40، وBA9 في الموضوعات مع التوحد مقابل الضوابط
التحكم التوحد تغيير P القيمة ل المخيخ



GABRα1 / β-أكتين ب 1.350 ± 0.470 0.504 ± 0.356 63٪ 0.007 GABRα2 ​​/ β-أكتين ب 0.073 ± 0.028 0.053 ± 0.025 27٪ نانوثانية GABRα3 / β-أكتين ب 0.216 ± 0.100 0.142 ± 0.073 34٪ نانوثانية GABRβ3 / β-أكتين ب 0.061 ± 0.022 0.030 ± 0.013 51٪ 0.008 GABBR1 / β-أكتين ج 0.051 ± 0.018 0.017 ± 0.006 67٪ 0.0049 GABBR2 / β-أكتين 0.068 ± 0.028 0.037 ± 0.012 46٪ 0،026 BA40



GABRα1 / β-أكتين ب 0.955 ± 0.305 0.458 ± 0.266 52٪ 0.018 GABRα2 ​​/ β-أكتين ب 0.214 ± 0.054 0.131 ± 0.060 39٪ 0،033 GABRα3 / β-أكتين ب 0.166 ± 0.039 0.072 ± 0.049 57٪ 0.005 GABRβ3 / β-أكتين ب 0.039 ± 0.011 0.024 ± 0.006 38٪ 0،006 GABBR1 / β-أكتين ج 0.079 ± 0.049 0.023 ± 0.026 71٪ 0.019 GABBR2 / β-أكتين 0.29 ± 0.27 0.061 ± 0.038 79٪ نانوثانية BA9



  • ا
    اثنين من الذيل مستقل مجموعة تي الاختبار.
  • ب يتم طبع قيم GABRα1، GABRα2، GABRα3، وGABRβ3 بعد الحصول على اذن من سبرنجر: مجلة للتوحد واضطرابات النمو، GABA A مستقبلات Downregulation في أدمغة من الموضوعات المصابين بالتوحد، وحجم 39، 2009، صفحة 226، فاطمي SH، Reutiman TJ، Thuras PD، الجدول 2.
  • ج يتم طبع قيم GABBR1 بعد الحصول على اذن من سبرنجر: المخيخ، التعبير عن GABA (B) مستقبلات هو تغيير في العقول من الموضوعات المصابين بالتوحد، وحجم 8، 2009، صفحة 67، فاطمي SH، فولسوم TD، Reutiman TJ ، Thuras PD، الجدول 2.
GABRα1 / β-أكتين ب 0.260 ± 0.050 0.090 ± 0.062 65٪ 0.012 GABRα2 ​​/ β-أكتين ب 0.159 ± 0.041 0.092 ± 0.042 42٪ نانوثانية GABRα3 / β-أكتين ب 0.127 ± 0.006 0.193 ± 0.083 52٪ نانوثانية GABRβ3 / β-أكتين ب 0.040 ± 0.002 0.041 ± 0.009 2.5٪ نانوثانية GABBR1 / β-أكتين ج 0.076 ± 0.023 0.023 ± 0.024 70٪ 0.021 GABBR2 / β-أكتين 0.115 ± 0.016 0.053 ± 0.042 54٪ نانوثانية
ومن المثير للاهتمام، وتبين GABRβ3 الفئران خروج المغلوب انخفاض كبير في حجم الفصيصات vermal المخيخ II-VII بالمقارنة مع السيطرة على الفئران (DeLorey وآخرون، 2008). هذه الظاهرة قد تكون ذات صلة إلى GABRβ3 downregulation الملاحظة. هناك دعم إضافي في الأدب 15q11-Q13 تشوهات مكان في 1-4٪ من الموضوعات مع مرض التوحد الذي يضم مجموعة الجينات لGABRβ3، GABRα5، ومستقبلات GABRγ3 (SCHROER وآخرون، 1998؛ ماكولي وآخرون، 2004) . الشذوذ GABRβ3 في الفئران يؤثر على التعلم والذاكرة والنتائج في زيادة epileptogenesis (DeLorey وآخرون، 1998، 2008). وعلاوة على ذلك، لوحظ العجز GABRβ3 في مناطق أخرى من المخ من الموضوعات مع التوحد كما سنناقش أدناه.

GABA A و GABA B مستقبلات البروتين التعبير في BA9


في BA9 (متفوقة القشرة الأمامية) GABA واحد فقط وأظهر مستقبلات (GABRα1 / β-الأكتين) معنوي (P <0.012)، و 65٪ downregulation في أدمغة المصابين بالتوحد موضوعات مقابل مطابقة الضوابط (الشكل الجدول 1، فاطمي وآخرون آل، 2009B). وعلى نفس المنوال، من اثنين من GABA B مستقبلات أظهرت فقط GABBR1 / β-الأكتين لذلك، خفض كبير 70٪ (P <0.021) في BA9 (الجدول الشكل 2؛ فاطمي وآخرون، 2009A). GABBR2 / β-الأكتين، على الرغم من تخفيض 54٪، لم يصل إلى مستوى مهم (الجدول 1؛ فاطمي وآخرون، 2009A). في المقابل، ساماكو وآخرون. (2005) لاحظ GABRβ3 downregulation في BA9 من الموضوعات مع مرض التوحد، الذي ارتبط في وقت لاحق مع نتائج مماثلة من قبل Hogart وآخرون. (2007). واقترح هؤلاء الكتاب أن التقلبات جينية قد تكون مسؤولة عن downregulation من مستويات GABRβ3 في الموضوعات مع التوحد.

GABA A و GABA B مستقبلات البروتين التعبير في BA40


في BA40 (القشرة الجدارية) من الموضوعات مع التوحد لاحظنا downregulation كبير من كل أربعة GABA A مستقبلات: GABRα1 / β-الأكتين تم تخفيض بنسبة 52٪ (P <0.018)، تم تخفيض GABRα2 ​​/ β-الأكتين بنسبة 39٪ (P < 0.033)، تم تخفيض GABRα3 / β-الأكتين بنسبة 57٪ (P <0.005)، وانخفض GABRβ3 / β-الأكتين بنسبة 38٪ (P <0.006) مقارنة مع الضوابط (الشكل الجدول 1، فاطمي وآخرون .، 2009B). وعلى الرغم من انخفاض كبير في GABBR1 / β-الأكتين (71٪) وGABBR2 / β-الأكتين (79٪)، وصلت فقط الحد GABBR1 / β-الأكتين دلالة إحصائية (الجدول 1؛ P <0.019) بالمقارنة مع الضوابط الملائمة. لدينا بيانات من التخفيضات العالمية في GABA A مستقبلات فضلا عن تخفيضات مستقبلات GABBR1 في BA40 من الموضوعات المصابين بالتوحد هي فريدة من نوعها منذ يناقش أي تقرير نشرته السابق مثل هذه التخفيضات في الجدارية القشرة. ومع ذلك، Princivalle وآخرون. (2003) أظهرت التعبير تغير من GABBR1 (1A و 1B إيسفورمس) وGABBR2 في قرن آمون من الموضوعات مع صرع الفص الصدغي. تجدر الإشارة إلى أن اضطراب الاستيلاء وجدت في 4-44٪ من المرضى يعانون من مرض التوحد (توكمان ورابين، 2002). وجود اضطراب الحجز في الأشخاص الذين يعانون من مرض التوحد قد تتداخل مع الإدراك من خلال التسبب في اضطراب اليقظة والانتباه، وإنتاج اللغة (بيني، 1993). وتجدر الإشارة، مع ذلك، أن الغالبية العظمى من المرضى الذين يعانون من اضطرابات الاستيلاء لا تعرض الاضطرابات المعرفية. على الرغم من هذا الاعتلال المشترك العالي للمضبوطات، وبعد أن كان سبعة مواضيع في المرضية مجموعتنا مع اضطراب الحجز، فإن أيا من التخفيضات في GABA A وGABA B ارتبطت بشكل إيجابي مستقبلات أن ذلك يعود إلى إنتاج الاستيلاء إحصائيا (فاطمي وآخرون، 2009A). هناك أيضا نماذج حيوانية متعددة لاضطراب الاستيلاء التي تظهر انخفاضا في مستويات GABBR1 وGABBR2 التعبير في مختلف مجالات الحصين (Princivalle وآخرون، 2003؛. Straessle وآخرون، 2003؛ هان وآخرون، 2006).

في الختام، أظهرت البيانات بروتين تعبير downregulation كبير في عدة GABA A وGABA B مستقبلات في الدماغ ثلاثة مواقع مهمة في الموضوعات مع التوحد التي قد تكون مسؤولة عن العديد من الظواهر السريرية للمرض التوحد بما في ذلك وجود المضبوطات، واضطرابات التعلم، والتخلف العقلي ربما. ومن المؤمل أن التجارب السريرية في المستقبل يمكن استخدام هذه النتائج الأساسية نحو تحسين استخدام العقاقير التي يمكن أن تعدل GABA نشاط مستقبلات في العقول من الموضوعات مع التوحد.

تعليقات ختامية


أخذت معا، فإن الدراسات autoradiographic والكيميائية الحيوية من المختبرات المعنية تشير إلى تغييرات عميقة في النظام GABAergic في التوحد. ومن غير الواضح ما إذا كانت هذه التغيرات نتيجة لتحور الجين GAD (ق)، وآليات جينية مثل التغيرات في الحامض النووي أو تعديل هيستون أو تشوهات العصبية النمائية الأخرى مثل توصيل الأسلاك من afferents إلى الخلايا العصبية GABAergic و / أو الإخراج غير طبيعي لل الخلايا العصبية GABAergic. تغييرات في معدلات إطلاق الخلايا العصبية قد تؤثر على مستويات GAD مرنا، GAD التعبير الجيني، وإطلاق سراح GABA، والكثافة GABA المستقبلة. هناك حاجة لمزيد من الدراسات التي تركز على afferents glutamatergic في المخيخ لتقييم أفضل لكيفية تأثر التغييرات التي أعلن عنها في نظام كابح أو التي هي نتيجة لاضطرابات محتملة في نظام مثير الرئيسي في الدماغ التوحد.

شكر وتقدير


تم الحصول على الأنسجة البشرية من معاهد الصحة القومية الدماغ والأنسجة البنك لاضطرابات النمو. الأنسجة هارفارد المخ مركز الموارد، وهو معتمد في جزء من عدد المنح PHS R24 MH068855. البنك الدماغ الأوقاف، الذي يتم تمويله جزئيا من قبل المؤسسة الوطنية للباركنسون، وشركة، ميامي، فلوريدا. واعترف وبرنامج الأنسجة التوحد والعرفان. المساعدة التعاونية من الدكاترة. J.-J. Soghomonian، TT جيبس، J. ييب، وA. Oblak لمساعدة GJB والتقنية من T. فولسوم وT. Reutiman إلى SHF هو أيضا تقدير وعرفان.

الأدب مستشهد

  • بيلي A، Luthert P، عميد A، هاردينغ B، جانوتا I، مونتغمري M، روتر M، لانتوس P. 1998. دراسة إكلينيكية للمرض التوحد. الدماغ 121: 889 - 905.
  • بومان ML، كمبر TL. 1985. الملاحظات Histoanatomic من الدماغ في وقت مبكر التوحد الطفولي. الأمراض العصبية 35: 866 - 874.
  • بومان ML، كمبر TL. 2005. تشريح الدماغ الهيكلي في التوحد: ما هو الدليل؟ و: بومان ML، كمبر TL. والمحررين والبيولوجيا العصبية من التوحد. 2ND الطبعة. بالتيمور، MD: مطبعة جامعة جونز هوبكنز. ص 121 - 135.
  • Bäurle J، Grüsser-Cornehls U. 1997. عدد التفريقي للخلايا العصبية ومحطات glycine- وGABAimmunopositive في نوى المخيخ عميقة من انحطاط الخلية فئرانا معدلة وراثيا العادية والعصبية. J شركات Neurol 382: 443 - 458.
  • بيني CD. 1993. أهمية وإدارة الادراكي مؤقتة بسبب تصريف EEG تحت الإكلينيكي عند الأطفال. الدماغ ديف 15: 23 - +30.
  • بلات GJ، فيتزجيرالد CM، غبتيل] JT، بوكر AB، كمبر TL، بومان ML. 2001. الكثافة وتوزيع المستقبلات العصبية قرن آمون في التوحد: دراسة autoradiographic. J التوحد ديف Disord 31: 537 - 543.
  • بلات GJ، Soghomonian JJ، ييب J. 2010. كربوكسيل حمض الجلوتاميك (GAD) والعلامات البيولوجية النشاط GABAergic في التوحد وأثرها على الدوائر المخيخ وظيفة. في: بلات GJ، المحرر. إن أساس كيميائي عصبي التوحد. نيويورك: سبرينغر. ص 95 - 112.
  • تشان بالاي V. 1977. المسنن مخيخي نواة: منظمة، علم الخلايا والإرسال. برلين: سبرينغر.
  • تشن S، هيلمان DE. 1993. Colocalization من الناقلات العصبية في نوى المخيخ المسنن. J Neurocytol 22: 81 - +91.
  • دي زيو CI، Holstege JC، Calkoen F، Ruigrok TJ، Voogd J. 1988. A تركيبة جديدة من WGA-HRP تتبع تقدمي وGABA مناعية تطبيقها على afferents القط الزيتون أدنى على مستوى التركيبية. الدماغ الدقة 447: 369 - 375 .
  • دي زيو CI، لانج EJ، سوغيهارا I، Ruigrok TJ، آيزنمان LM، Mugnaini E، يناس R. 1996. يرتبط المورفولوجية التزامن الثنائي في الفئران قشرة المخ. J Neurosci 16: 3412 - 3426.
  • دي زيو CI، سيمبسون JI، كاسبر C، Hoogenraad CC، Galjart N، Koekkoek SKE، Ruigrok TJH. 1998. الدارات الدقيقة وظيفة من الزيتون أدنى. اتجاهات Neurosci 21: 391 - 400.
  • DeLorey TM، هاندفورث A، Anagnostaras SG، Homanics GE، ميناسيان BA، Asatourian A، Fanselow MS، دلغادو-Escueta A، اليسون GD، اولسن RW. 1998. الفئران التي تفتقر إلى الوحيدات بيتا 3 من GABA A مستقبلات يكون النمط الظاهري الصرع و العديد من الخصائص السلوكية لمتلازمة أنجلمان. J Neurosci 18: 8505 - 8514.
  • Delorey TM، Sahbaie P، هاشمي E، Homanics GE، كلارك دينار. 2008. الجين Gabrb3 الفئران التي تعاني من نقص معرض السلوكيات الاجتماعية والاستكشافية ضعف، العجز في الانتباه غير انتقائي وتنسج من فصيصات vermal المخيخ: نموذج محتمل لاضطرابات طيف التوحد. Behav الدماغ الدقة 187: 207 - 220.
  • Esclapez M، Tillakaratne NJ، توبين AJ، هاوزر CR. 1993. توطين مقارن لمن mRNAs ترميز شكلين من كربوكسيل حمض الجلوتاميك مع امشع الموقع في طرق التهجين. J شركات Neurol 331: 339 - 362.
  • فاطمي SH، وقف AR، Realmuto G، ايرل J، كيست DA، Thuras P، ميرز A. 2002. يتم تقليل حجم الخلية العصبية في المخيخ من المرضى الذين يعانون من مرض التوحد. خلية مول Neurobiol 22: 171 - 175.
  • فاطمي SH، فولسوم TD، Reutiman TJ، Thuras PD. 2009A. يتم تبديل التعبير عن GABA (B) المستقبلات في المخ من الموضوعات مع التوحد. المخيخ 8: +64 - 69.
  • فاطمي SH، Reutiman TJ، فولسوم TD، Thuras PD. 2009B. downregulation GABA (A) مستقبلات في أدمغة المصابين بالتوحد المواضيع. J التوحد ديف Disord 39: 223 - 230.
  • Fredette BJ، Mugnaini E. 1991. وGABAergic مخيخي زيتوني الإسقاط في الفئران. عنات Embryol 184: 225 - 243.

 

__________________
استشارى الادوية الطبيعيه وباحث وخبير فى علاجات التوحد
رد مع اقتباس
  #33  
قديم 12-06-2015, 07:04 PM
رافت ابراهيم رافت ابراهيم غير متواجد حالياً
عضو ذهبي
 
تاريخ التسجيل: Dec 2011
المشاركات: 520
افتراضي

 

15q11.2-13.3 تحليل لونين يكشف عن تنظيم جينية من CHRNA7 مع أوجه القصور في ريت والتوحد الدماغ

داغ H. Yasui1، *، هالي A. Scoles1، شين إشي Horike2، ماكيكو ميغورو-Horike2،3، كيث دبليو Dunaway1، ديان I. Schroeder1 وجانين M. LaSalle1



1Department الميكروبيولوجيا الطبية والمناعة، مركز الجينوم في جامعة كاليفورنيا ديفيس كلية الطب، أحد الدروع شارع ديفيس، CA 95616
منظمة 2Frontier العلوم، جامعة كانازاوا، 13-1 Takaramachi، كانازاوا 920-0934، اليابان
3JSPS زميل أبحاث

↵ * عنوان المراسلات إلى: داغ H. ياسوي، دكتوراه علم الأحياء الدقيقة الطبية والمناعة، واحدة شيلدز افي. ديفيس، CA 95616 (530) 754-7906 (الهاتف)، (530) 752-8692 (الفاكس)، dhyasui@ucdavis.edu

تلقى 1 يوليو 2011.
تلقى مراجعة 1 يوليو 2011.
قبلت 8 أغسطس 2011.

ملخص

عدد النسخ المتغيرات (التنوعات) داخل 15q11.2-13.3 تظهر البشري انخفاض انتفاذ التعبيرية ومتغير في مجموعة من الاضطرابات العصبية. لذلك، واصفا 15q11.2-13.3 هيكل لونين المهم لفهم تنظيم هذا الموضع خلال تطوير الخلايا العصبية العادية. حذف مركز يطبع-برادر ويلي (PWS-IC) داخل 15q11.2-13.3 يعطل بعيدة المدى مطبوع التعبير الجيني مما يؤدي إلى متلازمة برادر ويلي. النتائج السابقة تثبت أن MeCP2 بربط PWS-IC ومطلوب من أجل التعبير الأمثل للGABRB3 القاصي وUBE3A. لفحص الفرضية القائلة بأن MeCP2 يسهل النسخ 15q11.2-13.3 من خلال ربط PWS-IC لعناصر بعيدة، القبض على كروموسوم التشكل على رقاقة تم تنفيذ (4C) تحليل الخلايا العصبية في SH-SY5Y الإنسان. كانت الخلايا العصبية SH-SY5Y 2.84 أضعاف أقل 15q11.2-13.3 PWS-IC تفاعلات لونين من غير متمايز neuroblasts SH-SY5Y، وكشف التنموي لونين دي التكثيف من موضع. من 68 PWS-IC التفاعلات with15q11.2-13.3 التي حددها تحليل 4C وخمسة مواقع فقط أظهرت 62 15q11.2-13.3 مواقع الربط MeCP2 التي حددتها الدراسات السابقة رقاقة رقاقة التداخل. بشكل ملحوظ، وهما من هذه المواقع PWS-IC وMeCP2 تداخل ملزمة تعيينها إلى مواقع المرافقة CHRNA7 تكويد مستقبلة الكوليني، النيكوتينيك، ألفا 7. PWS-IC التفاعل مع CHRNA7 في الخلايا العصبية وأكد بشكل مستقل عن طريق تحليل FISH. يحلل النسخي الكمي لاحق من القشرة الأمامية من متلازمة التوحد وريت المرضى كشفت انخفاض كبير في التعبير CHRNA7 مقارنة بالمجموعة الضابطة. معا، وتشير هذه النتائج إلى أن النسخ من CHRNA7 يتم عن طريق التضمين تفاعلات لونين مع PWS-IC. وبالتالي فقدان التفاعل لونين بعيدة المدى ضمن 15q11.2-13.3 يمكن أن تسهم في عدة الاضطرابات العصبية النمائية الإنسان.
http://hmg.oxfordjournals.org/conten...g.ddr357.short

 

__________________
استشارى الادوية الطبيعيه وباحث وخبير فى علاجات التوحد
رد مع اقتباس
  #34  
قديم 12-06-2015, 08:05 PM
رافت ابراهيم رافت ابراهيم غير متواجد حالياً
عضو ذهبي
 
تاريخ التسجيل: Dec 2011
المشاركات: 520
افتراضي نمذجة عامل خطر التوحد لدى الفئران يؤدي إلى التقلبات المناعة دائم

 

http://www.pnas.org/content/109/31/12776.full




أدلة متزايدة يسلط الضوء على دور لجهاز المناعة في التسبب في اضطراب طيف التوحد (ASD)، كما لوحظ ديسريغولاتيون المناعة في الدماغ، المحيط، والجهاز الهضمي الأفراد ASD. وعلاوة على ذلك، إصابة الأم (تفعيل المناعي للأم، MIA) هو أحد عوامل الخطر لASD. نمذجة عامل المخاطرة في الفئران ينتج ذرية مع سلوكية وأعراض عصبية مرضية الكاردينال من ASD البشري. في هذه الدراسة، نجد أن أبناء الأمهات تنشيط مناعة عرض لمحات المناعية المعدلة وظيفة، والتي تتميز عجز النظامية في الخلايا التنظيمية CD4 + TCRβ + Foxp3 + CD25 + T، وزيادة IL-6 و IL-17 الانتاج CD4 + خلايا T، ومستويات مرتفعة من GR-1 + الخلايا الطرفية. بالإضافة إلى ذلك، الخلايا الجذعية المكونة للدم من MIA ذرية يحمل غيرت إمكانات النسب الدم النخاعي والتمايز. ومن المثير للاهتمام، إعادة إسكانها السيطرة على الفئران المعرضة للإشعاع مع نخاع العظام المستمدة من MIA ذرية لا يمنح العجز المناعية المرتبطة MIA، تورط السياق البيئي الطرفية في البرمجة على المدى الطويل من الخلل المناعي. وعلاوة على ذلك، والشاذ سلوكيا ذرية MIA التي تم المشع وزرعها مع نخاع العظم الطبيعي مناعيا من أي MIA أو السيطرة على نسل لم يعد يحمل العجز في سلوكيات نمطية / التكرار والقلق المتشابهة، مما يوحي بأن شذوذ المناعية في MIA ذرية يمكن أن تسهم في ASD-ذات الصلة السلوكيات. هذه الدراسات تدعم وجود صلة بين التقلبات المناعة الخلوية والعجز السلوكية المتعلقة ASD في نموذج الفأر من عامل خطر التوحد.
التوحد هو اضطراب النمو العصبي المعقدة والاهتمام الطبي الضغط، مما يؤثر على أكثر من 1٪ من الأطفال في الولايات المتحدة (1). على الرغم من أن يتميز اضطراب طيف التوحد (ASD) من خلال السلوكيات النمطية واللغة والعجز الاجتماعي، تشير أدلة متزايدة على دور لجهاز المناعة في ASD المرضية. تم العثور على ملامح خلوى تغيير في الدماغ بعد الوفاة، السائل النخاعي، والبلازما في ASD، ولقد أثبتت العديد من الدراسات على عدد مرتفع وتفعيل الخلايا الدبقية الصغيرة والخلايا النجمية في الدماغ بعد الوفاة (2). هناك أيضا العديد من التقارير من تشوهات المناعة الطرفية في الأفراد المصابين بالتوحد، بما في ذلك زيادة نشاط الخلايا القاتلة الطبيعية، التفاضلية ردود الوحيدات إلى التحفيز في المختبر، وتغيير مستويات المصل الإيج (3، 4).
تنشيط غير طبيعي في جهاز المناعة قد يكون أيضا المشاركة في مسببات مرض التوحد. ويرتبط العديد من الدراسات خطر ASD مع بالجينات المرتبطة بالمناعة مثل تلك ترميز MET مستقبلات التيروزين كيناز، PRKCB1، تكمل C4B، والنسخ المتنوعة HLA محددة (3، 4). بالإضافة إلى ذلك، يتم رفع الأجسام المضادة antibrain في بعض الأمصال ASD وفي بعض أمهات الأطفال المصابين بالتوحد (5 - 7). تظهر أفراد الأسرة من الأطفال الذين يعانون من التوحد، وخاصة الأمهات، ارتفاع عدد حالات الحساسية أو أمراض المناعة الذاتية (8، 9). وتمشيا مع مشاركة المناعة هي النتائج أن إصابة الأم هو أحد عوامل الخطر لمرض التوحد (2). بعد وباء الحصبة الألمانية 1964، 8-13٪ من الأطفال الذين ولدوا لأمهات مصابات بالمرض وضعت ملامح التوحد (10). في دراسة حديثة مسح جميع الأطفال الذين ولدوا في الدنمارك 1980-2005، تم العثور على ارتباط كبير جدا بين مرض التوحد والعدوى الفيروسية الأمهات خلال الأشهر الثلاثة الأولى من الحمل (11). وعلاوة على ذلك، يرتبط ارتفاع IFN-γ، IL-4، أو IL-5 في مصل الأم مع خطر متزايد للASD في النسل (12)، كما هو ارتفاع الوحيدات جاذب كيميائي البروتين-1 في السائل الذي يحيط بالجنين (13).
إذا كانت شذوذ المناعية في ASD تسهم فعلا في أعراضه سلوكية أو ما إذا كانت ظاهرة عارضة من الاعتلال العصبي الأساسي هو مسألة معلقة. الجهاز المناعي يعرض التفاعلات المتبادلة مدى الحياة مع النظام العصبي المركزي، وحقيقة أن الوضع المناعي يمكن أن تؤثر الاستجابات السلوكية ويتضح من الدراسات في وقت مبكر مما يدل على أن الردود على العدوى والالتهاب يتم ترحيل إلى الدماغ، مما يؤدي إلى تحريض الحمى والمرض السلوك (14). وعلاوة على ذلك، وإدارة بعض السيتوكينات لمواضيع الإنسان في كثير من الأحيان يسبب تغيرات ملحوظة في الحالة النفسية (15). على العكس من ذلك، يمكن أن الحالة العاطفية والنفسية تؤثر الوظيفة المناعية. ولعل أقوى دليل حتى الآن هو النتيجة أن كلا من المديين القصير والإجهاد تؤدي على المدى الطويل إلى اختلال وظيفة المناعة (16). كما تم المتورطين ديسريغولاتيون المناعة في المسببات مجموعة متنوعة من الاعصاب، النفسية، والاضطرابات العصبية النمائية، بما في ذلك الرعاش، هنتنغتون، وأمراض الزهايمر والتصلب المتعدد، الاكتئاب الشديد، والفصام، وإدمان (17 - 20).
وهنا نسأل ما إذا كان نموذج الفأر واظهار العديد من الميزات التوحد يعرض أيضا الوظيفة المناعية المعدلة. نستخدم تنشيط جهاز المناعة (MIA) نموذج الأمهات، والتي تقوم على إصابة الأم كعامل خطر بيئي رئيسي لمرض التوحد. يتم حقن الفئران الحوامل مع الاصطناعية، RNA المزدوج تقطعت بهم السبل، وبولي (I: C)، لبدء الاستجابة المضادة للفيروسات proinflammatory. هذا النوع من MIA ينتج ذرية مع أعراض سلوكية وعصبية مرضية الأساسية للتوحد، بما في ذلك انخفاض التفاعل الاجتماعي والتواصل غير طبيعي، نمطية / السلوك المتكرر، والعجز المقيد مكانيا في الخلايا العصبية (21، 22).
في هذه الدراسة، ونحن لمحة فرعية هامشية المناعة، وتقييم الأنشطة الفنية الأنساب الكريات البيض الرئيسية وتقييم إمكانية نسب الخلايا الجنينية والكبار للدم الجذعية (HSCs) والأسلاف. لاستكشاف إمكانية برمجة ما قبل الولادة من الخلل المناعي على المدى الطويل، ونحن فحص ما إذا كان نقل HSCs من MIA ذرية في غير MIA ذرية يمكن أن تحفز خلايا مستقلة شذوذ المناعية. للحصول على نظرة ثاقبة سواء شذوذ المناعية في MIA ذرية تسهم في التسبب في السلوكيات المتعلقة ASD، ونحن تقييم سلوكيا بولي (I: C) ذرية إسكانها مع نخاع العظم (BM) من ذرية المالحة. وتوضح النتائج التي توصلنا إليها أن التحدي المناعي خلال حياة ما قبل الولادة ويؤدي إلى تغييرات مناعية مستمرة في ذرية بعد الولادة، والتي يمكن أن تزيد من تأثير على تطوير أو صيانة السلوك الشاذ.
النتائج

MIA العجز النسل عرض في خلايا T التنظيمية ومرتفعة CD4 + T الردود خلية.

العديد من الدراسات من التقلبات المناعي في تقرير ASD البشري انحياز النمط الظاهري proinflammatory (3، 4). وبالتالي فإننا التحقيق الخلايا التائية التنظيمية (Tregs) كما المكثفات معروفة من الاستجابات المناعية الفطرية والتكيفية. مقارنة مع الضوابط، والأبناء الراشدين من بولي (I: C) عرض أمهات -injected انخفاض ~50٪ في الطحال CD4 + Foxp3 + CD25 + Tregs (الشكل 1 A.). وينعكس هذا العجز أيضا في انخفاض مستويات بشكل ملحوظ من إجمالي CD4 + Foxp3 + الخلايا والانخفاضات الممكنة (P = 0.0846) في CD4 + Foxp3 + CD25 - خلايا T. ويلاحظ، وFoxp3 + CD25 + الخلايا أيضا في الغدد الليمفاوية المساريقي (MLNs) من بولي الكبار (I: C) - عجز مماثلة في مجموع CD4 + Foxp3 +، Foxp3 + CD25 ذرية (الشكل S1 A.). وعلى الرغم من هذه الاختلافات في مستويات Treg، لا يوجد فرق في قمع CD4 + CD25 - انتشار خلايا T بين Tregs من المياه المالحة مقابل بولي (I: C) ذرية (الشكل S2.). أخذت معا، وهذه النتائج تشير إلى وجود عجز النظامية في وفرة Tregs.

تين. 1.
MIA يؤدي إلى انخفاض مستويات Tregs وفرط الاستجابة في خلايا CD4 + T من الطحال من الأبناء الراشدين. (A) مقارنة مع الضوابط، وبولي الكبار (I: C) انخفض ذرية المعرض مستويات CD4 + Foxp3 + splenocytes وCD4 + Foxp3 + CD25 + Tregs = 5، حيث تمثل كل عينة مجموعة من ثلاثة الطحال). انخفض ذرية المعرض مستويات CD4 الطحال + TCRβ + Foxp3 + CD25 + Tregs، ولكن لا يوجد فرق كبير في CD4 الطحال + TCRβ + IFN-γ + 17 IL + خلايا Th17 + TH1 أو CD4: (B) بولي الكبار (C I) + TCRβ + IFN-γ - IL-17 + خلايا Th17 = 4، حيث تمثل كل عينة مجموعة من ثلاثة الطحال). (C) + CD4 T خلايا من الطحال من الأبناء الراشدين تفرز مستويات مرتفعة من IL-6 و IL-17 في استجابة لسلطة النقد الفلسطينية / التحفيز ionomycin. في المقابل، خلايا CD4 + T من الطحال من بولي الكبار (I: C) وذرية المالحة لا تختلف مستوى TNF-α يفرز = 11-16). * P <0.05، ** P <0.01 *** P <0.001؛ م، لم تكن كبيرة. تظهر جميع لوحات واحد تجربة تمثيلية من اثنين على الأقل محاكمات منفصلة.

اختبرنا كذلك MIA ذرية لمستويات IL-17-إنتاج CD4 + T (Th17) الخلايا، نظرا لطبيعتها proinflammatory وذكرت علاقة متبادلة مع Tregs. في المقايسات القيام به بالتوازي مع تلك الخاصة Tregs، لا نجد فرقا كبيرا من التحكم في مستويات CD4 + TCRβ + IL-17 + (Th17) الخلايا، مع أو من دون التعبير IFN-جاما (الشكل 1 B). لا توجد أيضا أي اختلاف في مستوى CD4 + TCRβ + IL-17 - IFN-γ + (TH1) الخلايا. لمواصلة دراسة خلايا CD4 + T، قمنا بقياس إفراز بهم من IL-6 و IL-17 ردا على التحفيز في المختبر. مقارنة مع الضوابط، CD4 + الخلايا من الطحال من بولي منذ 15 أسبوع (I: C) الإفراج ذرية بشكل ملحوظ أكثر IL-6 و IL-17 بعد التحفيز في المختبر، مع عدم وجود اختلاف في إفراز-TNF ألفا (الشكل 1 C ). وقد لوحظ هذه النتيجة بالمثل مع خلايا CD4 + T الطحال المستمدة من ذرية من العمر 3-فالتر كالين (الشكل S3 A) وذرية 1-Y عمره (الشكل S3 B) مما يدل على أن وقت مبكر من بداية الخلل المناعي المستمر. ومن المثير للاهتمام، وخلايا CD4 + T الطحال من الفئران القديمة 3-أسبوع-تنتج مستويات أقل بكثير من IL-17 من يفعل مثل هذه الخلايا من الأبناء الراشدين (0-10 جزء من الغرام / مل مقارنة مع 50-400 غ / مل)، مما يعكس عدم النضج المناعية ورد في الشباب مقابل الفئران والبشر البالغين (23). خلايا CD4 + T من MLNs بولي (I: C) ذرية أيضا hyperresponsive إلى التحفيز في المختبر، مما يشير إلى أن هذا الشذوذ هو شائع إلى الأجهزة اللمفاوية الثانوية (الشكل S1 C و D.). عموما، MIA يؤدي إلى خفض مستويات Treg والاستجابة T خلايا CD4 + مرتفعة في الطحال وMLNs من MIA ذرية. ويمكن وصف هذه النتيجة بمثابة استمرار، proinflammatory النمط الظاهري T-المساعد خلايا.

MIA النسل عرض زيادة مستويات GR-1 + خلايا ومنحرفة HSC التمايز.

لتحديد ما إذا MIA أثناء التطور الجنيني يغير هوية فرعية مناعية أخرى في النسل، قمنا بتقييم الطبقات الكريات البيض الرئيسية في الطحال من بولي (I: C) وذرية المالحة. مقارنة مع الضوابط، وبولي الكبار (I: C) ذرية يحمل 1.5 أضعاف مستوى أعلى من GR-1 + الخلايا وزيادة تتجه في CD11b + الخلايا (P = 0.1256) (الشكل 2 A.). في المقابل، لا يوجد فرق من التحكم في النسب المئوية من إجمالي B220 + B الخلايا، والخلايا NK1.1 + NK، خلايا CD4 + T، أو خلايا CD8 + T. وعلاوة على ذلك، تم الكشف عن عدم وجود اختلافات كبيرة لأي من أنواع فرعية الكريات البيض الأولية في MLNs (الشكل S1 B).

تين. 2.
MIA يؤدي إلى زيادة مستويات GR-1 + خلايا الطحال في الأبناء الراشدين والتمايز تفضيلية من HSCs في السلائف محببة في ذرية الجنين والكبار. (A) الطحال من بولي الكبار (I: C) ذرية المعرض زيادة مستويات GR-1 + خلايا وجود فروق ذات دلالة في الأنساب الرئيسية الأخرى مقارنة مع الضوابط = 4، حيث تمثل كل عينة مجموعة من ثلاثة الطحال). (B) وبالمقارنة مع BM HSCs من السيطرة ذرية، BM HSCs من بولي الكبار (I: C) عرض ذرية زيادة التمايز في السلائف CFU-G وانخفض التمايز في وقت مبكر السلائف CFU-GM = 4). مقارنة مع الضوابط، HSCs الكبد الجنين من يوم الجنينية (E) 13.5 (C، يسار) وE15.5 (C، يمين) بولي (I: C) ذرية أيضا عرض ازدياد التمايز في CFU-G وانخفض التمايز في CFU-GM ، بالإضافة إلى انخفاض نسب CFU-GEMM مع E13.5 HSCs وزيادة نسب CFU-E مع E15.5 HSCs = 4، حيث تمثل كل عينة مجموعة من الخلايا من ستة كبد الجنين من القمامة واحدة). * P <0.05، ** P <0.01 *** P <0.001؛ م، لم تكن كبيرة. جميع لوحات تمثل واحدة تجربة تمثيلية من اثنين على الأقل محاكمات منفصلة.

GR-1 + خلايا تعكس مجموعة غير متجانسة من أنواع فرعية المناعية التي تضم العدلات وحيدات، وخلايا التهابية، والخلايا القامع، على حد سواء. لتحديد ما إذا كانت مستويات مرتفعة من GR-1 + خلايا لوحظ في بولي (I: C) يمكن أن يعزى الطحال لخاصة GR-1 + فرعية، وتتميز نحن كذلك الطحال GR-1 + السكان الذين يستخدمون CD11b، Ly6C، وعلامات Ly6G . ومن المثير للاهتمام، وبولي (I: C) ذرية تظهر زيادة معتدلة في جميع السكان ثلاثة من GR-1 + خلايا حلها: (ط) GR-1 مرحبا CD11b + Ly6C منتصف Ly6G منتصف SSC مرحبا، (ب) GR-1 منتصف CD11b + Ly6C منتصف Ly6G منتصف SSC منتصف، و (ج) GR-1 منتصف CD11b + Ly6C مرحبا Ly6G- SSC لو (الشكل. S4). GR-1 + فرعية الأول والثاني ويشار إلى العدلات، عن طريق الأنسجة وتمشيا مع التفاصيل العالية، ويتم تحديد النوع الفرعي الثالث كما يبلغ عدد سكانها الوحيدات (24). عموما، أن بولي (I: C) ذرية زيادة العرض في كل حددت GR-1 + السكان تشير إلى أن انحراف في شهادة الثانوية العامة أو مستوى السلف قد تكمن وراء ارتفاع GR-1 النمط الظاهري لوحظ في بولي الكبار (I: C) ذرية مقارنة مع الضوابط .
لتقييم أصل الزيادة في الطحال GR-1 + خلايا، قمنا بتقييم إمكانية النسب وتمايز الخلايا BM من بولي الكبار (I: C) مقابل ذرية المالحة. باستخدام الفحص تشكيل مستعمرة لتقييم شكليا النسب التمايز، نجد أن HSCs والأسلاف من بولي (I: C) زيادة النسل BM معرض التمايز في CFU-G (محببة) السلائف وانخفض التمايز في وقت مبكر CFU-GM (محببة-بلعم ) السلائف (الشكل 2 B). وتطرق إلى الجنين، نجد أن التمايز مماثل لوحظ مع HSCs الكبد الجنين والأسلاف من بولي (I: C) ذرية (الشكل 2 C). وهكذا، MIA يدفع التمايز تفضيلية من الجنين وكذلك HSCs الكبار والأسلاف إلى السلائف محببة، والتي قد تكون مسؤولة عن زيادة مستويات GR-1 + خلايا ناضجة في الطحال من بولي (I: C) ذرية مقارنة مع الضوابط.

شذوذ المناعية لوحظ في MIA النسل لا يتم نقل عبر BM زراعة.

بياناتنا تظهر أن MIA يؤدي إلى الملف الشخصي تغير من الخلايا المناعية الطرفية في النسل، وتتميز انخفاض مستويات Tregs، خلايا CD4 + T hyperresponsive، ومستويات مرتفعة من GR-1 + الخلايا. لاستكشاف ما إذا كانت هذه الشذوذات المناعية (والنمط الظاهري GR-1، على وجه الخصوص) يمكن أن يعزى إلى البرمجة التنموية للHSCs خلايا الجوهرية، قمنا بنقل BM من بولي الشاذة مناعيا (I: C) ذرية في المياه المالحة المشع وبولي (I : C) ذرية وتقييم ما إذا كانت إعادة تأسيس أي شذوذ المناعية MIA المصاحب.
نجد أن المياه المالحة وبولي (I: C) ذرية التي تم المشع وأعيد مع بولي (I: C) BM لا تتطور أو الاحتفاظ بأي من تشوهات المناعة التي أظهرتها unmanipulated MIA ذرية. جميع الفئات المستويات المعرض BM المزروعة من الطحال CD4 + CD25 + + TCRβ Foxp3 + Tregs وGR-1 + الخلايا التي هي مماثلة لتلك التي لوحظت في ذرية المالحة untransplanted (الشكل 3 أ و ب). كما لا يوجد فرق بين المياه المالحة والفئران BM المزروعة في توزيع فرعية السلف بعد في المختبر تمايز BM HSCs (الشكل S5). وعلاوة على ذلك، خلايا CD4 + T معزولة عن الطحال أي من أنواع الفئران BM المزروعة-تفرز مستويات IL-6 و IL-17 ردا على phorbol 12 ميريستيت 13-خلات (PMA) / ionomycin التحفيز التي هي مماثلة لتلك التي التي تنتجها خلايا CD4 + T معزولة عن الطحال من untransplanted ذرية المالحة (الشكل 3 C). الأهم من ذلك، أن الفئران المالحة زرعها مع مستويات الملوحة عرض BM ما يعادل Tregs وGR-1 + خلايا ومماثل CD4 + الاستجابة T-خلية لتلك التي لوحظت في ذرية المالحة unmanipulated تشير إلى أن الإشعاع وBM-زرع الإجراء في حد ذاته لا تحرف ملامح نظام المناعة في ظل هذه الظروف. عموما، هذه التجارب تشير إلى أن MIA المرتبطة الشذوذات المناعية لا يتم نقل عبر زرع بولي (I: C) BM إلى المالحة المشع أو بولي (I: C) ذرية. وتشير هذه النتيجة إما أن المكروية HSC مهمة للحفاظ على تغيير إمكانات شهادة الثانوية العامة في MIA النسل، أو أن لا يتم برمجة MIA المرتبطة شذوذ المناعي بشكل خاص على مستوى الخلايا الجذعية.

تين. 3.
لا يتم نقلها شذوذ المناعية التي لوحظت في MIA ذرية من قبل BM زرع في الفئران المشع. (A) وليس هناك فرق في مستويات الطحال CD4 + CD25 + + TCRβ Foxp3 + Tregs بين المالحة أو بولي (I: C) ذرية المزروعة مع BM من المياه المالحة أو بولي (I: C) ذرية. مستويات Tregs الطحال بين BM الجماعات زرع مماثلة لتلك التي لوحظت في ذرية المالحة untransplanted. بولي untransplanted (I: C) ذرية عرض عجزا كبيرا في نسبة Treg = 4-5). لا تعرض الفئران (B) BM-زرع MIA المرتبطة الزيادات في GR-1 + خلايا الطحال. نسب GR-1 + خلايا قابلة للمقارنة بين الجماعات BM المزروعة وuntransplanted ذرية المالحة = 4-5)، ولكن بولي untransplanted (I: C) ذرية المعرض مستويات مرتفعة بشكل ملحوظ من GR-1 + خلايا الطحال. خلايا (C) + CD4 T من الفئران BM-زرع يحمل إحصائيا مستويات مماثلة من IL-6 (يسار) وIL-17 (يمين) في استجابة لسلطة النقد الفلسطينية / التحفيز ionomycin في المختبر. لا توجد فروق بين تركيزات IL-6 و IL-17 التي يفرزها CD4 + الخلايا من مجموعة BM المزروعة ومن ذرية المالحة untransplanted، على الرغم من فرط الاستجابة كبير من خلايا CD4 + T من بولي (I: C) ذرية [ن ​​= 11 -16 لالمالحة وبولي (I: C) مجموعات، 4-5 للمجموعات زرع BM]. * P <0.05، ** P <0.01. تم الحصول على بيانات زرع BM من تجربة واحدة كبيرة.


تين. 4.
MIA ذرية المشع وزرع بمحلول ملحي BM المعرض انخفض السلوك المتكرر ومثل القلق. (A) التشعيع وزرع المالحة BM إلى MIA ذرية يعيد سلوك دفن الرخام المتكررة إلى مستوى عند أو أقل من تلك التي لوحظت في الضوابط. (B) التشعيع وزرع المالحة BM إلى MIA ذرية يقلل السلوك مثل القلق مقاسا زيادات كبيرة في عدد من مداخل المركز (مركز) ومدته في الساحة المركز (يسار)، مقارنة مع تلك التي لوحظت في الفئران MIA untransplanted. كلا المالحة وبولي (I: C) الفئران BM-زرع أيضا تظهر تزايد النشاط العام في المجال مفتوحا، إذا ما قيست زيادة كبيرة المسافة الإجمالية سافر مقارنة مع الفئران untransplanted (يمين). (C) زرع ذرية المالحة BM في بولي (I: C) ذرية ليس له تأثير كبير على سلوكهم تفضيل الاجتماعي، مقاسا مدة الغرفة (يسار). هناك، ومع ذلك، تحسن تتجه في السلوك الاجتماعي تفضيل مقاسا تردد غرفة في BM-زرع MIA ذرية (يمين). * P <0.05، ** P <0.01؛ م، لم تكن كبيرة. تم الحصول على بيانات BM-زرع من تجربة واحدة كبيرة.

BM زرع في MIA النسل طبيعتها المتكرر والقلق على غرار السلوكية شذوذ.

للتحقيق في ما إذا كان الشذوذ المناعية الموجودة في MIA ذرية هي أمراض مواز مستقل أو إذا كانت تساهم فعليا في تطوير أو صيانة السلوكيات ASD الشبيهة، قمنا بتقييم الأداء السلوكي في بولي (I: C) ذرية المزروعة بمحلول ملحي BM. وأكد: (C I) ذرية لأول مرة لعرض الظواهر السلوكية المتوقعة أمام إجراء بولي. مقارنة مع الضوابط، وبولي (I: C) ذرية عرض عجزا في تثبيط prepulse (PPI) (الشكل S6 A.). يستخدم PPI لقياس الحسية النابضة من رد الفعل جفل، وانخفضت كثيرا ما لوحظ PPI في الأفراد المصابين بالتوحد (25). بولي (I: C) ذرية كما تظهر عليهم أعراض سلوكية أساسية من مرض التوحد، بما في ذلك زيادة تكرار السلوك إذا ما قيست مستويات أعلى من دفن الرخام النمطية وانخفض تفضيل الاجتماعي، وفقا لتقييم تخفيض مدة المستهلك والإدخالات في السكن غرفة ماوس رواية مقابل الماوس مألوفة (الشكل. S6 B و C). وبالإضافة إلى ذلك، ارتفع MIA ذرية المعرض القلق، كما يتضح من انخفاض مدة قضى، والدخول الى، الساحة وسط حقل مفتوح، على الرغم من عدم اختلاف كبير في المسافة الإجمالية سافر (الشكل. S6 D).
بعد هذا الاختبار السلوكي الأولي، تم المشع الفئران وزرعها مع BM المانحة حصادها سواء من الكبار أو المالحة بولي (I: C) ذرية. والجدير بالذكر أن ومحمية رؤساء الماوس أثناء إجراء للحد من الآثار المعروفة للإشعاع على تكوين الخلايا العصبية وتفعيل الدبقية، ويحول دون أي تأثيرات المصب المرتبطة بها على الأداء السلوكي. وعلاوة على ذلك، MIA ذرية لا يحمل التغيرات العالمية في مستويات المنشط أو مجموع الضامة الدماغ / الخلايا الدبقية الصغيرة (الشكل S7)، مما يوحي بأن تشوهات دبقية لا تساهم في استمرار السلوكيات المتعلقة ASD في هذه الفئران.
بعد التشعيع وزرع بمحلول ملحي BM، MIA ذرية لم تعد تظهر الانحرافات السلوكية في العديد من هذه الاختبارات. التشعيع والمالحة BM زرع في بولي (I: C) ذرية يعيد دفن الرخام المتكررة إلى المستويات التي سجلت في الضوابط المالحة (الشكل 4 A.). بالإضافة إلى ذلك، المشع وBM-زرع MIA ذرية المعرض انخفضت بشكل ملحوظ مثل السلوك والقلق، والتي تقاس مدة مرتفعة من الوقت الذي يقضيه وإدخالات في الساحة وسط الميدان مفتوح (الشكل 4 B). ومن المثير للاهتمام، سواء المالحة وبولي (I: C) BM زرع الفئران المعرض عدد متزايد من إدخالات مركز مقارنة مع ذرية untransplanted. وينعكس هذا الاستنتاج مماثل زيادة ذات دلالة إحصائية في المسافة الإجمالية التي يقطعها ذرية المزروعة مقابل الضوابط untransplanted. قد يكون هذا الاستنتاج نتيجة لآثار الإجراء التشعيع وزرع على السلوك بدلا من التعود على الفئران لاختبار المتكررة، لأننا قادرون على تكرار العجز المجال مفتوح من شدة ما يعادلها في بولي (I: C) ذرية بعد إعادة الاختبار في مختلف الأعمار الكبار (الشكل S8). من ناحية أخرى، وعلاج بولي (I: C) ذرية بمحلول ملحي BM ليس له تأثير كبير على العجز في تفضيل الاجتماعي، مقاسا مدة وعدد الإدخالات في غرفة الاجتماعية (الشكل 4 C.).
على الرغم من أن علاج MIA ذرية مع التشعيع والمالحة BM زرع يعيد إلى حد كبير سلوك طبيعي في العديد من الاختبارات، نجد أن علاج MIA ذرية مع التشعيع وبولي (I: C) BM زرع يحسن أيضا تلك السلوكيات. والجدير بالذكر أن المشع MIA ذرية المزروعة مع بولي (I: C) BM معرض تحسين المجال مفتوحا والأداء ودفن الرخام (الشكل S9.). هذه النتيجة تتفق مع ما توصلت إليه أن زرع بولي (I: C) BM لا تؤدي الى خلية مستقلة تشوهات المناعي (الشكل 3). على هذا النحو، على حد سواء بولي (I: C) ويمكن اعتبار BM والمالحة BM العادي مناعيا في هذه التجارب. معا، وتظهر هذه البيانات التي MIA ذرية التي عرضت سابقا السلوكيات الشاذة تفشل لعرض تكرار السلوك ومثل القلق بعد التعرض للإشعاع وBM زرع.

نقاش

في هذه الدراسة أن نحدد الاختلافات في الاستجابات المناعية الخلوية الحيوية في نموذج الفأر من عامل خطر التوحد. نسل الأمهات تنشيط المناعة تطوير الشخصية المتغيرة المناعي وظيفة في الطحال وMLN، التي تتفق مع النمط الظاهري proinflammatory. وبالإضافة إلى ذلك، علينا أن نظهر التمايز النخاعي تفضيلية من HSCs والأسلاف الجنين، وهي موجودة أيضا في HSCs الكبار. هذا الاستنتاج يمكن أن تشكل أساسا لتوزيع المناعية المعدلة في الأجهزة اللمفاوية الثانوية من MIA ذرية. ومع ذلك، زرع BM من HSCs المستمدة من MIA ذرية لا يكفي أن ألخص مستويات مرتفعة من GR-1 + الخلايا التي أظهرتها untransplanted MIA ذرية. هذه النتيجة تسلط الضوء على أهمية العظة البيئية المناسبة للحفاظ على هذا النمط الظاهري، كما هو مبين أدناه. كما استخدمنا نهج زرع التشعيع-BM لاستكشاف دور الخلل المناعي الطرفية على الأداء السلوكي. ومن المثير للاهتمام، هذا الإجراء بتصحيح بعض الأعراض السلوكية ASD تشبه في النسل MIA.
MIA يؤدي إلى دائمة خلايا CD4 + T hyperresponsive، وكذلك انخفضت Tregs في النسل، مما يشير إلى مزمنة، النمط الظاهري proinflammatory. وتتوافق هذه النتيجة مع انخفاض أعداد CD4 + CD25 + والخلايا CD3 + T + GITR لوحظ في الأطفال مع ASD (26، 27). قد يعكس تضاؤل ​​مستويات Treg وما يرتبط بها من النقص في التنظيم المناعي النتيجة أن الأفراد الذين يعانون من التوحد المعرض انخفاض مستويات السيتوكينات التنظيمية، مثل TGF-β1، وزيادة مستويات السيتوكينات proinflammatory في مصل الدم، الدماغ السائل المخي الشوكي وبعد الوفاة (2). وعلاوة على ذلك، بالنظر إلى أن Tregs هي حاسمة للحد من تنشيط جهاز المناعة ومنع التفاعل الذاتي، نقص بهم قد تكمن وراء التقارير على وجود صلة بين ASD وأمراض المناعة الذاتية (8، 28).
اكتشافنا أن خلايا CD4 + T من MIA ذرية هي hyperresponsive لفي المختبر تحفيز مزيد يعكس توازن المناعة تقلص. ولوحظت زيادات في تنشيط خلايا DR + T في التوحد البشري (29، 30). بالإضافة إلى ذلك، توجد مستويات مرتفعة من الخلايا T-TNF ألفا وIFN-γ المنتجة في الدم المحيطي والغشاء المخاطي المعوي من الأفراد التوحديين (31). وقد أفاد عدد من غيرها من الاستجابات المناعية المعدلة في ASD (3، 4)، ونجد أن MIA ذرية أيضا يحمل بعض هذه التغيرات، بما في ذلك مجموعات فرعية الكريات البيض CD4 + تغيير والردود T-الخلية إلى التحفيز. هذا التداخل بين نتائج التقلبات المناعة في ASD والنتائج الحالية لدينا يضفي الدعم لMIA كنموذج الفأر مع بناء وصحة الوجه لهذا الاضطراب.
علينا أن نبرهن أيضا أن MIA أثناء التطور الجنيني يؤدي إلى زيادة كبيرة في مستويات هامشية GR-1 + CD11b + العدلات وخلايا الوحيدات في الأبناء الراشدين. وعادة ما يلاحظ كثرة المحببات بعد التهاب حاد (32، 33) وأيضا سمة من عدد من الأمراض المزمنة (34 - 36). لم تكن هناك تقارير عن مستويات العدلات تغيير في ASD، ولكن. في دراسة واحدة، والأطفال الذين يعانون من التوحد أظهرت زيادة التهم الوحيدات البلازما، ولكن لا تشوهات كبيرة في أنواع فرعية محببة الكبرى (37). في ضوء النتائج الحالية، وسوف تكون ذات فائدة للتمديد هذه الدراسات immunophenotypic إلى القطعان السلوكية أو أعراض الأفراد ASD.
ومن المثير للاهتمام أن نرى أن آثار MIA على HSCs النامية قد تكمن وراء بعض التغيرات المناعية الطرفية استمرار وجود في النسل. نجد أن كلا من البالغين وHSCs والخلايا الاصلية الجنين عرض التمايز التفضيلي إلى مستعمرات CFU-G، الذي يقدم تفسيرا لكيف يمكن الحفاظ على زيادات في مثل هذه الخلايا قصيرة الأجل على مدى عمر MIA ذرية. ومن المعروف الحقن للحث على زيادة كبيرة في السيتوكينات proinflammatory في المشيمة، مكانة شهادة الثانوية العامة الرئيسية خلال midgestation (: بولي الأمهات (C I) 38). لأن HSCs والأسلاف تستجيب لإشارات التهابات، مثل السيتوكينات وبروابط مستقبلات تول مثل، سيكون من المثير للاهتمام أن استكشاف ما إذا كانت التغييرات MIA التي يسببها في البيئة HSC يمكن أن يميل القرارات النسب المكونة للدم ومصير.
على الرغم من أن HSCs والأسلاف عزل من بولي (I: C) ذرية وتميل تنمويا نحو السلائف محببة، زرع BM من بولي (I: C) ذرية في المشع ذرية المالحة أو العودة إلى بولي المشع (I: C) ذرية لا يتم نقل النمط الظاهري GR-1. وتشير هذه النتيجة أن البرمجة التنموية للHSCs إلى الانحراف لا يخضع التمايز النسب في MIA ذرية فقط بعوامل خلايا الجوهرية المشفرة ثابت، مثل تعديل جينية. بدلا من ذلك، فمن المرجح أن بيئة الطرفية MIA التي يسببها ضرورية لتزويد العظة التي توجه التنمية الدم النخاعي تفضيلية. التغييرات في G-CSF، IL-5، وIL-3 مستويات، على سبيل المثال، وتورط في صقل النشاط عامل النسخ الذي يحكم اختيار النسب عن الأسلاف محببة / البلاعم (39). في الواقع، لقد وجدنا أن MIA ذرية تظهر دينامية وتغير مزمن في الدم المحيطي وملامح خلوى الطحال (40). وسوف تكون ذات فائدة لتقييم ما إذا المكروية BM تختلف في بولي (I: C) وذرية المالحة. عموما، فمن المثير للاهتمام أن النمط الظاهري GR-1 لاحظ في MIA ذرية لا ينقل عبر BM زرع، مما يشير إلى عدم وجود ما يكفي من خلايا الجوهرية برمجة جينية ودور رئيسي للعوامل البيئية في الترويج لهذا خيار النسب.
علينا أن نبرهن على إخضاع ذرية MIA التي صادق العجز السلوكية للأشعة وإعادة مع BM العادي مناعيا يغير النمط الظاهري السلوكية. وهي هذه MIA ذرية لم يعد يحمل تشوهات خلال الجلسة السابقة في تكرار دفن الرخام والميدان مفتوح الاستكشاف. هذه النتائج تعني أن تصحيح الوظيفة المناعية يمكن تصحيح بعض الانحرافات السلوكية المرتبطة بالتوحد. ومع ذلك، هذه التجربة وجود قيود كبيرة. في حالة عدم وجود مراقبة إيجابية (MIA ذرية التي تحتفظ العجز السلوكية بعد التشعيع وزرع BM)، ونحن غير قادرين على التمييز بين الآثار التصالحية المحتملة للBM نفسها (وهذا هو، والآثار المترتبة على استعادة النمط الظاهري المناعي) مقابل تأثير العوامل المربكة المرتبطة إجراء عملية زرع. الأكثر وضوحا من هذه هو تأثير الإشعاع على مختلف جوانب التوازن المتلقي، بما في ذلك وظيفة التمثيل الغذائي، وتكوين الجراثيم المعوية، والاكسدة، والتي قد تؤثر بشكل غير مباشر نتيجة سلوكية. نحن، ومع ذلك، مستوحاة من التظاهر الأعمال الأخيرة التي نمطية السلوك الاستمالة في فئرانا معدلة وراثيا Hoxb8 هو، في الواقع، للتحويل عبر BM زراعة (41). وهذا يدل على العثور، على الأقل في هذا النموذج التجريبي، يمكن أن الفئران إعادة تكوين وجود ضعف في السلوك المتوقع عبر BM زرع على الرغم من أشعة مسبق. سيكون من المهم استكشاف نهج تجريبية أخرى لعلاج ضعف المناعة في MIA ذرية ومواصلة تقييم ما إذا كانت هذه النتائج يمكن أن تخفف السلوكية.
ومع ذلك، النتيجة في أن الانحرافات السلوكية في النسل MIA يمكن تصحيحها عن طريق إجراء عملية زرع التشعيع-BM يساهم في عدد متزايد من الدراسات الإبلاغ عن فعالية BM زرع على تخفيف أعراض الاضطرابات العصبية (41 - 43). وعلاوة على ذلك، العديد من التجارب باستخدام RAG1 KO، SCID، والفئران athymic تثبت أن الخلل المناعي الأولي يمكن أن يؤدي إلى ضعف السلوكية (44 - 47). ومن المثير للاهتمام، والعمل مع خالية من الجراثيم الفئران يربط غياب الجراثيم والتعديلات المرتبطة بها في الجهاز المناعي لأداء السلوك الشاذ (48). وقد وصفت بعض التعديلات المناعية في نموذج حمض فالبرويك الأمهات وسلالة الماوس BTBR التي تعرض الميزات السلوكية للتوحد (49، 50). في المقابل، لا يزال هناك الكثير الذي يمكن تعلمه عن التغيرات المناعية المحتملة في نماذج الماوس من ASD الجينات المرشحة. واحدة من هذه الجينات هو جاذبية خاصة في هذا الصدد، MET، الذي يشفر مستقبلات التيروزين كيناز وكما هو معروف أن تلعب دورا في تنظيم جهاز المناعة (51).
وترتبط ملامح المناعة المحيطية المتغيرة والنشاط الخلوي أيضا يعانون من إعاقات سلوكية أساسية في ASD البشري. زيادة مستويات البلازما IL-4 ترتبط مع عجز أكبر في مجال الاتصالات، وزيادة البلازما IL-8، ترتبط IL-12p40، IL-6، وIL-1β إلى الرتابة، وفرط النشاط، وعشرات الخمول من الأطفال ASD (52). مستويات غيرت من العوامل المناعية الأخرى، بما في ذلك TGF، بلعم عامل مثبط للهجرة (MIF)، وCD31، كما تم المرتبطة شدة السلوكيات المتعلقة ASD أو الفيزيولوجيا المرضية (4). وبالإضافة إلى ذلك، ترتبط انخفاض مستويات مفتش البلازما والغلوبولين المناعي مع شدة السلوكية في الأطفال ASD (53).
ومن الملفت للنظر أنه في نموذج الفأر من عامل خطر بيئي التوحد أن يسلك سلوكية وأعراض عصبية مرضية الكاردينال التوحد، وهناك أيضا دائم ديسريغولاتيون المناعة الطرفية. يوفر هذا الاكتشاف فرصة لاستكشاف الآليات الجزيئية الكامنة وراء العلاقة بين اختلال وظيفي في الدماغ ومناعة المتغيرة في مظهر من مظاهر السلوك الشاذ. وعلاوة على ذلك، يوفر هذا الاكتشاف منبرا للتحقق في كيفية وتحديات ما قبل الولادة يمكن أن برنامج طويل الأجل بعد الولادة الحصانة، والصحة، والمرض. الأمهات بوساطة إهانة تعديل جينية في خلايا شهادة الثانوية العامة والسلف هو واحد آلية محتملة لكيفية يجوز إنشاء تأثيرات تغيرات البيئية عابرة حتى الآن لا تزال قائمة بشكل دائم في مرحلة البلوغ. ومع ذلك، تشير نتائج زرع BM أن البيئة المحيطة من نسل MIA أمر بالغ الأهمية أيضا للحفاظ على الدولة المناعية المعدلة بشكل دائم.

طرق

يتم توفير طرق مفصلة في طرق SI.
MIA.

تم حقن الفئران الحوامل C57BL / 6N على E12.5 بمحلول ملحي أو بولي (I: C). للبولي (I: C) الحقن، وبولي (I: C) تم حل ملح البوتاسيوم (سيغما الدريتش) في المياه المالحة في 4 ملغ / مل وتدار البريتونى على 20 ملغ / كلغ [على أساس الوزن للبولي (I: C ) نفسه، وليس بما في ذلك الوزن الكلي للملح البوتاسيوم]. تم حقن الفئران التحكم مع المالحة وحدها في 5 ميكرولتر / غرام من وزن الجسم.

CD4 + T الخلية في المختبر تحفيز.

10 6 CD4 + كانت خلايا T مثقف في كامل RPMI مع سلطة النقد الفلسطينية (50 نانوغرام / مل) وionomycin (750 نانوغرام / مل) لمدة 3 د عند 37 درجة مئوية مع 5٪ (المجلد / المجلد) CO 2. كل يوم، تم جمع 0.5 مل طاف. ELISA لكشف IL-6، IL-17، وأجريت TNF-α وفقا لتعليمات الشركة الصانعة (eBioscience).

التدفق الخلوي.

للتصنيف الفرعي من GR-1 + splenocytes، كانت ملطخة الخلايا مع GR-1-APC، CD11b-PE، Ly6G-APC، Ly6C-FITC، وTer119-PerCP-Cy5.5 (Biolegend). للكشف عن خلايا Th17 وTregs، وحفز splenocytes لمدة 4 ساعات مع سلطة النقد الفلسطينية / ionomycin بحضور GolgiPLUG (BD العلوم البيولوجية). وأغلقت تعليق لمستقبلات التيسير وصفت مع CD4-FITC، TCRb-PerCP-Cy5.5، وCD25-PE قبل وضع العلامات مع IFN-γ-PE وFoxp3-APC (eBioscience). تم تجهيز العينات باستخدام FACSCalibur الكريات (BD العلوم البيولوجية). وقد تم تحليل البيانات باستخدام برنامج FlowJo (TreeStar).

ميثيل مستعمرة تشكيل الفحص.

2 × 10 5 أضيفت خلايا الكبد أو BM الجنين إلى 3 مل من ميثيل إذابة تستكمل مع SCF، IL-3، IL-6، وإبو (StemCell). تم احتساب مجموع عدد مستعمرة في يوم 5، وأكد أن يعادل بين المجموعات. كفو-G، -M، -E (محمر)، -GM، والمستعمرات -GEMM وسجل عمياء في يوم 12 وفقا لبروتوكولات القياسية.

BM زرع.

سلوكيا تم حقن اختبار، فئران عمرها 9 فالتر كالين-البريتونى مع جرعة عالية من الكيتامين / زيلازين (5.6 ميكرولتر / 1 غ لكل الماوس) والمشع القاتلة (1000 راد) مع رؤساء محمية من قبل 4 ملم الرصاص. وأكد فعالية الدروع رأسه الشيب انتقائية من اللون الأسود معطف في المنطقة المعرضة للإشعاع. تم تخدير الفئران تعافى مع isofluorane وحقن الرجعية orbitally مع 5 × 10 6 خلايا BM المانحة. تم اختبار الفئران في النماذج السلوكية في 17-19 أسبوع من العمر، وقتل لفحوصات مناعية في 19-20 أسبوع من العمر.

اختبار السلوكية.

في 6-8 أسبوع من العمر، وخضعوا للاختبار الفئران سلوكيا لPPI، التنقيب في حقول مكشوفة، دفن الرخام المتكررة، وتفضيل الاجتماعي (22، 38، 54، 55). بعد ثمانية أسابيع زرع، تم اختبار الفئران على نحو مماثل في جميع النماذج ولكن PPI لPPI أداء حساس للغاية لمعالجة واختبار تجربة السابقة (56).

التحليل الإحصائي.

تم إجراء التحليل الإحصائي مع بريزم البرمجيات (Graphpad). تم تقييم الاختلافات بين مجموعات العلاج اثنين من استخدام الطلاب ر الاختبار، وجرى تقييم الاختلافات بين مجموعات متعددة باستخدام باتجاه واحد ANOVA وBonferroni الاختبار اللاحق. وقد استخدم في اتجاهين ANOVA وBonferroni الاختبار اللاحق للPPI، CD4 + T الخلية التحفيز وبيانات ميثيل الفحص

 

__________________
استشارى الادوية الطبيعيه وباحث وخبير فى علاجات التوحد
رد مع اقتباس
  #35  
قديم 12-06-2015, 08:34 PM
رافت ابراهيم رافت ابراهيم غير متواجد حالياً
عضو ذهبي
 
تاريخ التسجيل: Dec 2011
المشاركات: 520
افتراضي آثار التنشيط المناعي للأم على أنماط التعبير الجيني في دماغ الجنين

 

http://www.nature.com/tp/journal/v2/...tp201224a.html

ملخص

نحن استكشاف الآليات الكامنة وراء كيفية إصابة الأم يزيد من خطر لمرض انفصام الشخصية ومرض التوحد في النسل. واستخدمت عدة نماذج الماوس التنشيط المناعي للأم (MIA) لدراسة الآثار المباشرة للMIA الناجم عن فيروس الأنفلونزا، وبولي (I: C) وانترلوكين IL-6 على Transcriptome على دماغ الجنين. نتائجنا تشير إلى أن جميع العلاجات MIA ثلاثة تؤدي إلى تغيرات التعبير الجيني قوية ومشتركة في الدماغ الجنيني. وعلى الأخص، هناك upregulation الحاد وعابرة للα، β γ والأسرة غلوبولين العدسة الجينات. وعلاوة على ذلك، هناك ارتباط كبير بين مستويات التعبير الجيني غلوبولين العدسة مع شدة MIA وفقا لتقييم وزن المشيمة. وتشير التغييرات الشاملة التعبير الجيني أن الاستجابة لMIA هي محاولة اعصاب من الدماغ النامية لمواجهة الإجهاد البيئي، ولكن بتكلفة تعطيل تمايز الخلايا العصبية نموذجية والنمو المحاور. نقترح أن هذا سلسلة من الأحداث قد موازية الآليات التي الشتائم البيئية تسهم في خطر الاضطرابات العصبية النمائية مثل الفصام والتوحد.
الكلمات الدالة:

مرض التوحد؛ الدماغ. غلوبولين العدسة. التعبير الجيني؛ الأم تنشيط جهاز المناعة. انفصام الشخصية

أعلى الصفحة المقدمة

إصابة الأم هو أحد عوامل الخطر لمرض انفصام الشخصية ومرض التوحد. في حالة انفصام الشخصية، ومجموعة متنوعة واسعة من العدوى أثناء الحمل (الفيروسية، البكتيرية والطفيلية) ترتبط بزيادة خطر الإصابة بهذا الاضطراب في النسل. تلخيص هذه المخاطر، براون وDerkits 1 تقدير أن> 30٪ من حالات الفصام سيتم منع إذا كان من الممكن تجنب الإصابة في النساء الحوامل. حقيقة أن هذا مجموعة متنوعة من مسببات الأمراض يرتبط خطر يوحي أنه استجابة الأم للعدوى التي تعتبر ضرورية لتغيير نمو مخ الجنين. في الواقع، يرتبط استجابة الأمهات أثناء الحمل (ارتفاع السيتوكينات وأضداد الممرض) مع الزيادة في حصيلة الفصام في النسل. وبالمثل لمرض التوحد، ودراسة> 10   كشفت 000 حالة في التسجيل الدنماركية الطبية وجود ارتباط بين إصابة بكتيرية أو فيروسية في الأم وزادت المخاطر بالنسبة للذرية. 2 مماثل أيضا إلى الفصام هي نتائج زيادة خطر لمرض التوحد في النسل إذا ارتقى السيتوكينات أو كيموكينات خاصة في مصل الأم أو السائل الذي يحيط بالجنين. 4 والملاحظة من التوافق أعلى بكثير في التوائم ثنائي الزيجوت بالمقارنة مع الأشقاء غير التوأم تشير أيضا إلى أهمية البيئة الأمومة والجنين في التوحد. 6
لتقليد المخاطر البيئية للتنمية الفصام والتوحد، وقد استخدمت عدة نماذج حيوانية لتفعيل المناعي للأم (MIA) بنجاح. 7 أولا، الأنف تقطير من فيروس الأنفلونزا البشري في الفئران الحوامل أو الرئيسيات غير البشرية يؤدي الى عدوى معتدل ولكن دون المميت، والنسل عرض سلسلة من التشوهات النسيجية والجزيئية في الحصين والقشرة. 9 الصغار والكبار الماوس MIA ذرية 10 أيضا يحمل على الأعصاب المخيخ التي توجد عادة في مرض التوحد. 11، 12 وعلاوة على ذلك، الفئران الكبار الذين يولدون لأمهات مصابات عرض الانحرافات السلوكية التي هي ذات الصلة إلى كل من الفصام والتوحد، بما في ذلك العجز في التفاعل الاجتماعي، وتثبيط prepulse، حقل مفتوح والاستكشاف وجوه الرواية، 10 وكذلك تزايد responsivity إلى المهلوسات. 13 ثانيا، MIA يمكن أيضا أن يتسبب في غياب مسببات الأمراض عن طريق حقن الفئران الحوامل والفئران أو القرود مع الرنا المزدوج الجديلة الاصطناعية، وبولي (I: C) لتقليد عدوى فيروسية أو مع lipopolysaccharide في لتقليد عدوى بكتيرية. وعموما، فإن النتائج السلوكية من إصابة الأم، وبولي (I: C) ونماذج lipopolysaccharide في متناسقة مع العديد من النتائج التي استنسخت في كل من الجرذان والفئران. 14، 15 الجزيئية والخلوية دراسات الأبناء الراشدين من بولي (I: C) المعالجة بالإثير القوارض تكشف تشوهات التي لها صلة بشكل واضح لمرض انفصام الشخصية، مثل زيادة مستويات GABA A مستقبلات α 2 مناعية، الدوبامين فرط الوظيفة، والتأخر في تكون الميالين الحصين، وانخفاض NMDA مستقبلات أرقام التعبير في الحصين، وانخفاض الخلايا reelin- وparvalbumin إيجابي في قشرة الفص الجبهي، وانخفاض الدوبامين D1 و D2 مستقبلات في قشرة الفص الجبهي، وتعزيز hydroxlyase التيروزين في هياكل الجسم المخطط. 16 ثالثا، MIA يمكن أن يتسبب بشكل مباشر عن طريق حقنة واحدة من خلوى انترلوكين IL-6 في الفئران الحوامل. 17 ويستند هذا النهج على النتائج أن هذا النسل عوائد حقن عرض العديد من نفس الانحرافات السلوكية وجدت في ذرية المصابين بالأنفلونزا أو بولي (I: C) السدود المعالجة بالإثير. وعلاوة على ذلك، وشارك في حقن مضاد للIL-6 كتل الأجسام المضادة آثار بولي (I: C)، مما أسفر عن نسل مع السلوك العادي. ويظهر كذلك على الأهمية الحاسمة لIL-6 في MIA قبل الاكتشاف الذي بولي (I: C) حقن في IL-6 الفئران خروج المغلوب أيضا ينتج ذرية مع السلوك العادي. 17 الفلافونويدات التي تعمل على منع JAK / STAT يشير المصب من مستقبلات IL-6 أيضا منع تحريض السلوكيات الشاذة من قبل الأمهات IL-6 الحقن. 18 الأم IL-6 هو أمر حاسم لتغيرات الغدد الصماء في المشيمة الناجمة عن MIA أيضا. 19، 20
ومع ذلك، ليست مفهومة جيدا الآثار المباشرة للMIA على دماغ الجنين. ومن الأهمية بمكان دراسة الآثار مبكرة جدا بسبب ارتفاع IL-6 التي تسببها الأمهات IL-6 الحقن عابرة، كما هو تأثير حقن الأجسام المضادة لمكافحة IL-6 حظر في السد حامل. هذه التأثيرات الحادة مع ذلك أن يؤدي إلى تغييرات دائمة في سلوك الأبناء. للحصول على فهم أفضل للأحداث الجزيئية التي تحدث في الدماغ MIA مكشوفة النامية، درسنا التغييرات Transcriptome على المرتبطة ثلاثة نماذج MIA مختلفة، والتعرف على وسطاء الأولى الحرجة التي قد تسهم في ظهور أعراض سلوكية في MIA ذرية .

أعلى الصفحة المواد والأساليب

الحيوانات والعلاجات MIA

وقد وافق جميع الإجراءات التي تنطوي على الحيوانات من قبل لجنة رعاية واستخدام الحيوان معهد كاليفورنيا للتكنولوجيا. تم الحصول على أنثى / 6J الفئران (مختبر جاكسون، بار هاربور، ME، الولايات المتحدة الأمريكية) C57BL من منزلنا في منشأة تربية وتم إيواؤهم في أقفاص التهوية تحت ظروف المختبر القياسية. تم تزاوج الفئران بين عشية وضحاها، ووجود المكونات المهبل شهد ذلك اليوم كيوم الجنينية 0 (E0). لم بالانزعاج الإناث الحوامل، إلا لتنظيف القفص أسبوعيا، حتى E9.5 عندما كان وزنه أنها وشبه عشوائيا المسندة إلى واحدة من أربع مجموعات. احتوت كل مجموعة 4-5 الإناث الحوامل.
واستخدمت: (C I) والمؤتلف IL-6 (ريلاينس اندستريز-6) للحث على MIA في الظروف التي أدت سابقا في ذرية تغيير السلوك العلاجات مع فيروس الأنفلونزا البشرية، وبولي. 10، 17 للسماح الوقت لتطوير عدوى الانفلونزا، تم تخدير الفئران الحوامل على E9.5 البريتونى مع 10   ملغ   كغم -1 زيلازين و 100   ملغ   كغم -1 الكيتامين وتلقيح الأنف مع 6000 وحدة تشكيل لوحة من فيروس الأنفلونزا البشرية في 90   الفوسفات مخزنة المالحة ميكرولتر (PBS). تم حقن الفئران الحوامل على E12.5 بمحلول ملحي، وبولي (I: C) أو ريلاينس اندستريز-6. للبولي (I: C) الحقن، وبولي (I: C) ملح البوتاسيوم (سيغما الدريتش، سانت لويس، MO، الولايات المتحدة الأمريكية) حلت حديثا في المياه المالحة وتدار البريتونى في 20   ملغ   كغم -1 على أساس الوزن للبولي (I: C) نفسها، وليس بما في ذلك الوزن الكلي للأملاح البوتاسيوم. تم حقن الفئران التحكم مع المالحة وحدها في 5   ميكرولتر   ز -1 وزن الجسم. لريلاينس اندستريز 6 حقن، 5   ميكروغرام خالية من الناقل، والماوس ريلاينس اندستريز-6 (eBioscience، سان دييغو، CA، الولايات المتحدة الأمريكية) حلت حديثا في 150   المالحة ميكرولتر وحقن داخل الصفاق. تم الفئران الحوامل قتلوا يوم E12.5 (3   ساعة بعد بولي (I: C) أو ريلاينس اندستريز 6 حقن و 3 أيام بعد التلقيح الأنفلونزا)، وأزيلت العقول الجنينية بسرعة والمجمدة في 1.5   أنابيب مل.
تحليل Transcriptome على

تم عزل الحمض النووي الريبي من العقول الجنينية الفردية باستخدام PureLink RNA مصغرة مجموعة (AMBION، شيكاغو، IL، الولايات المتحدة الأمريكية). تم تقييم نوعية RNA باستخدام اجيلنت (بالو ألتو، كاليفورنيا، الولايات المتحدة الأمريكية) Bioanalyzer. للحد من التعبير الجيني التقلبات التي لم الناجمة عن التعرض لMIA، RNA من كل الدماغ الجنيني داخل القمامة تم تجميعها في عينة واحدة، واستخدامها لتوليد عينة المسمى البيوتين لتهجين ميكروأري (خلفية مادة 1). هذا يسمح لنا لتحديد MIA الناجم عن التغييرات التعبير الجيني التي تم العثور عليها عادة في مخ الجنين من كل بطن، مما أدى إلى 4-5 يعيد لكل من الشروط الأربعة. وبالتالي، من إجمالي 138 الأجنة، 17 مجمعة تم إنشاؤها عينات الحمض النووي الريبي (كل منشؤها من جميع العقول الجنينية داخل السد حامل فرد) والمهجنة على GeneChip HT MG-430 لوحة PM 24-صفيف. على أساس التباين في تجاربنا الماوس السابقة، 21 قدرنا أن كان لدينا احتمال 80٪ لتحديد التغييرات التعبير الجيني الهامة التي كانت> 30٪. وكانت بيانات السجل   2 تحول باستخدام خوارزمية RMA، وتأسست التفاضلية التعبير. واعتبر أن الجينات وأعرب تفاضلي إذا (1) متوسط ​​سجل   نسبة 2 (ALR) بين العلاج التجريبية والضابطة تجاوزت 30٪ (| ALR |> 0.3785) و (2) كان الدلالة الإحصائية للفروق P <0.05 باستخدام الطالب ر -test. تم استخدام برنامج GenePattern (معهد برود، كامبريدج، CA، الولايات المتحدة الأمريكية) عن المجموعات الهرمية من شدة التعبير الجيني.
الكمية PCR

تم تجميع الحمض النووي الريبي معزولة عن الأجنة المقيمين في اليسار أو اليمين الرحم القرن نسبيا، حيث كانت هناك عينتين لكل السد حامل. استخدمت الفردية RNA الدماغ الجنيني أو عينات الحمض النووي الريبي المجمعة لتوليد كدنا] [كدنا مع قدرة عالية عكس عدة نسخ (النظم البيولوجية التطبيقية، سان ماتيو، كاليفورنيا، الولايات المتحدة الأمريكية). تم تشغيل SYBR إقحام الأخضر الكمي PCR (QPCR) في 7300 في الوقت الحقيقي نظام PCR (النظم البيولوجية التطبيقية) مع الاشعال التالية: غلوبولين العدسة γ A (cryaa) (F: 5'-TCTTCTTGGACGTGAAGCAC-3، R: 5'-GAAATGTAGCCATGGTCATCC -3)، غلوبولين العدسة α B (cryab) (F: 5'-TGTGAATCTGGACGTGAAGC-3، R: 5'-TGACAGGGATGAAGTGATGG-3)، غلوبولين العدسة βA1 (cryba1) (F: 5'-CCTGGAAAGAGGAGAATACCC-3، R : 5'-TTATGATTAGCGGAACAGATGG-3)، غلوبولين العدسة βA2 (cryba2) (F: 5'-ACCAGCAAAGATGTGGGTTC-3، R: 5'-GCCTAATGCTGGACTCTTCG-3)، غلوبولين العدسة βA4 (cryba4) (F: 5'-CACCACTCAGGTGACTACAAGC- 3 '، R: 5'-CCAGAGGACACAAGGGTAGC-3)، βB1 غلوبولين العدسة (crybb1) (F: 5'-TCCCAGGAACATAAGATCTGC-3، R: 5'-ACGGTCACAGAAGCCATAAAC-3)، βB3 غلوبولين العدسة (crybb3) (F: 5 '-CAGCCGACGTAGTGACATTC-3، R: 5'-TCATCTACGATCTCCATCTTGC-3)، غلوبولين العدسة γ B / A / C (crygb / أ / ج) (F: 5'-AGCGAGATGGGAAAGATCAC-3، R: 5'-AGTACTGGTGGCCCTGGTAG- 3 ') وغلوبولين العدسة γ C / A (crygc / أ) (F: 5'-TGCGGCTGTATGAGAAAGAA-3، R: 5'-CCTCGGTAGTTAGGCATCTCA-3).
كل هذه الاشعال مصمم خصيصا ذكرت الكفاءة التضخيم> 90٪. وقد تم تحليل البيانات QPCR باستخدام طريقة ddCt مع الجينات التدبير المنزلي فسفوغليسرات كيناز 1 (PGK1) كما بالتطبيع.
بالإضافة إلى ذلك، QPCR عن الجينات غلوبولين العدسة cryaa، cryba1 وcrybb1 أجريت مع 34 عينات الحمض النووي الريبي المجمعة من الأجنة التعرف على المقيمين في قرون الرحم إلى اليسار أو اليمين. وعلاوة على ذلك، تم فحص التعبير عن cryaa، cryba1 وcrybb1 أيضا QPCR في كل 36 العقول الجنينية الفردية النابعة من السدود المعالجة الأنفلونزا.
ارتباط وزن المشيمة مع القياسات التعبير الجيني

في وقت لتشريح، وقد تم قياس وزن المشيمة الفردية لكل الجنين. وتم تقييم وزن المشيمة في العلاج مع غرووبويس، الذيل اثنين ر -test. بالإضافة إلى ذلك، فقد ارتبط QPCR ذكرت التعبير عن غلوبولين العدسة مع متوسط ​​وزن المشيمة عبر العلاجات ومجموعات المراقبة باستخدام ارتباط بيرسون.

أعلى الصفحة النتائج

التغييرات في Transcriptome على flu-، وبولي (I: C) - وريلاينس اندستريز 6 المعاملة العقول الجنينية

وعولج خمسة سدود الحوامل مع ذلك، تقطير الأنف واحد من فيروس انفلونزا في E9.5. تم تشريح الأجنة في E12.5، وقت الذروة الأمهات IL-6 التعبير، وجمعت العقول. علاج واحد بولي (I: C)، كانت تدار ريلاينس اندستريز-6 أو المالحة إلى أربعة سدود الحامل لكل مجموعة في E12.5. جمعت العقول الجنينية من هذه العلاجات 3   ساعة بعد الحقن. تم عزل الحمض النووي الريبي من الدماغ بأكمله من الأجنة الفردية. حصلنا على 31-36 الأجنة في العلاج، والتي بلغت 138 عينات المخ الجنينية. لتحليل ميكروأري، وكان يتم تجميع العقول الجنينية من كل القمامة في عينة واحدة. باستخدام الفرق التعبير 30٪ من الضوابط حقن المياه المالحة والدلالة الإحصائية للP <0.05، حددنا 256 الجينات وأعرب تفاضلي في نموذج الانفلونزا، 294 في بولي (I: C) نموذج و 195 في نموذج IL-6. دراسة كل من الجينات وأعرب تفاضلي في اتجاهين (العينات والجينات) المجموعات الهرمية غير خاضعة للرقابة من شدة التعبير الجيني، والمجموعات التجريبية الأربعة منفصلة في مجموعات متميزة ( الشكل 1A) التي تتوافق مع العلاجات MIA مختلفة، مع مجموعات رئيسية تفصل علاج المالحة من كل العلاجات MIA الثلاثة. ومن المثير للاهتمام، والغالبية العظمى من الجينات المعدلة وبولي (I: C) وupregulated وIL-6 العلاجات، على الرغم من أن هناك العديد من الجينات downregulated في علاج الانفلونزا، والتي قد تعكس التغيرات التعبير الثانوية التي وقعت خلال الفترة التي استمرت 3 أيام بعد التعرض فيروس الأنفلونزا.
الشكل 1.

وغيرت Transcriptome على الدماغ الجنينية في ثلاث تنشيط جهاز المناعة (MIA) نماذج الأمهات. (أ) تعرض جميع النصوص وأعرب تفاضلي في العلاجات MIA إلى اتجاهين (الأفقية: الجينات؛ الرأسية: عينات) التجميع غير خاضعة للرقابة باستخدام GenePattern. الخلافات التعبير الجيني هي مرمزة (التعبير الحمراء زيادة؛ الزرقاء انخفضت التعبير)، وكثافة اللون يتوافق مع حجم التغير التعبير الجيني. لاحظ أن المجموعات التجريبية منفصلة في مجموعات متميزة التي تتوافق مع العلاجات MIA مختلفة، مع مجموعات رئيسية تفصل علاج المالحة من كل العلاجات MIA الثلاثة. - ز) تم إنشاؤها ثلاثة بيانات مجموعة الجينات تحدد يحركها، كل منها يحتوي على الجينات التي أعرب تفاضلي في واحد من النماذج MIA الثلاثة (256 الجينات في نموذج الانفلونزا، 294 في بولي (I: نموذج C) و 195 في المؤتلف IL-6 (ريلاينس اندستريز-6) نموذج). نحن بعد ذلك درست التعبير عن كل من هذه المجموعات الجين في الأخريين الأفواج MIA. وهكذا، تم اختبار نمط من الجينات وأعرب تفاضلي في علاج الانفلونزا في بولي (I: C) وريلاينس اندستريز 6 أفواج (ب و ج، على التوالي)، تم اختبار نمط الجينات وأعرب تفاضلي في علاج ريلاينس اندستريز-6 في الانفلونزا وبولي (I: C) الأفواج (d و e، على التوالي)، ونمط من الجينات وأعرب تفاضلي في بولي (I: C) تم تقييم العلاج في الانفلونزا وريلاينس اندستريز 6 أفواج (و) و (ز، على التوالي) . لاحظ أن أنماط التعبير الجيني كشفت في أي من العلاجات MIA ثلاثة تظهر، ارتباط كبير للغاية قوي جدا لالأخريين العلاجات MIA.
الرقم الكامل وأسطورة (273 K)

المقبل، ونحن اختبار إذا أظهرت التغييرات Transcriptome على نمط التعبير الشائع في جميع أنحاء العلاجات الثلاثة MIA مختلفة. ولقد خلقنا ثلاث مجموعات من الجينات وأعرب معظم تفاضلي: 256 الجينات في نموذج الانفلونزا، 294 في بولي (I: C) نموذج و 195 في نموذج IL-6. تم تقييم التوقيع مرنا من 256 محاضر وأعرب تفاضلي في نموذج الانفلونزا في بولي (I: C) وريلاينس اندستريز 6 transcriptomes. وجدنا أن، كمجموعة، كما تغيرت النصوص نموذج الانفلونزا بشكل ملحوظ في بولي (I: C) وIL-6 نماذج لMIA = 0.88، P = 1.8E-84 و r = 0.85، P = 5.95 E-72، على التوالي) ( الأرقام 1B و ج). وبالمثل، فإن 195 الجينات وأعرب تفاضلي في المجموعة IL-6-MIA تظهر فرقا كبيرا في التعبير الانفلونزا نموذج وبولي (I: C) العقول، نموذج = 0.85، P = 1.42E-55 و r = 0.85 ، P = 1.06E-54، على التوالي) ( أرقام 1D وه)، والتغييرات النص 294 في المجموعة IL-6 موجودة أيضا بشكل كبير في الانفلونزا وبولي (I: C) العلاج = 0.59، P = 8.78E-29 و r = 0.59، P = 3.9E-29، على التوالي) ( أرقام 1F وز). هذا هو مؤشر قوي على أن تؤثر على جميع العلاجات ثلاث عمليات الجزيئية مماثلة، على الرغم من آثارها قد تكون مختلفة بعض الشيء بسبب فارق التوقيت في التعرض للأنفلونزا والاختلاف الإشارات المصب المحتملة. وترد قائمة شاملة للجينات وأعرب تفاضلي ومستويات التعبير في خلفية المادة 2.
من النصوص مع 'معظم تغيرت "التعبير (> 30٪ تغير التعبير وP <0.05 في جميع العلاجات الثلاثة) تم تغيير 41 جينات في كل من IL-6 والانفلونزا علاج، 31 في بولي (I: C) والانفلونزا، 17 في بولي (I: C) وIL-6 و 12 جينات تم تغيير مماثل في جميع النماذج MIA الثلاثة. A المجموعات الهرمية من شدة التعبير عن هذه الجينات 12 بشكل واضح يفصل بين الضوابط المعالجة المالحة من الانفلونزا، وبولي (I: C) وIL-6 العلاجات ( الشكل 2).
الرقم 2.

وتشمل تغير الأهم النصوص في كل تنشيط جهاز المناعة (MIA) العلاجات الأمهات ثلاث عدة أعضاء من الأسرة غلوبولين العدسة الجينات. تم إجراء التجميع كما هو موضح في الشكل 1A. لاحظ أن من بين التغييرات التعبير الجيني 12 وحظ في جميع الظروف MIA الثلاثة، 5 هي الأنواع مرنا عائلة غلوبولين العدسة الجينات.
الرقم الكامل وأسطورة (73 K)

التغييرات التعبير الجيني المشترك بين العلاجات تشير إلى إشراك الأسرة الجينات غلوبولين العدسة

والمثير للدهشة، 5 من 12 الجينات التي upregulated في كل المعاملات MIA ثلاثة تنتمي إلى عائلة الجينات غلوبولين العدسة: cryaa، crybb3، crybb1، cryba1 وcrygb / crygc. للتحقق من صحة هذه النتيجة مع وسيلة مستقلة، ولدت لنا كدنا] من RNA المجمعة من الأجنة في كل السدود. للاستفسار عن تأثير محتمل للموقع في الرحم، وRNA المجمعة بشكل منفصل من أجنة المقيمين في اليسار وأبواق الرحم الصحيحة، لذلك كانت هناك عينتين لكل السد. لأكثر عرض تفصيلي على الأسرة غلوبولين العدسة من الجينات، ونحن أيضا اختبار التعبير عن cryab، cryba2، cryba4 وcrygc / أ. ترتبط البيانات QPCR للغاية مع البيانات ميكروأري (انفلونزا: ص = 0.82، P = 0.007؛ بولي (I: C): ص = 0.84، P <0.005؛ ريلاينس اندستريز-6: ص = 0.89، P = 0.001) ( الشكل 3). لا يوجد أثر واضح في موقف واضح.
الرقم 3.

الكمي PCR (QPCR) يؤكد غلوبولين العدسة التغييرات التعبير الجيني عبر تفعيل المناعي للأم (MIA) نماذج. تم اختبار التعبير عن تسعة جينات (غلوبولين العدسة α A (cryaa)، غلوبولين العدسة γ B / C / A (crygb / ج / أ)، غلوبولين العدسة γ C / A (crygc / أ)، غلوبولين العدسة βB1 (crybb1)، غلوبولين العدسة βA2 ( cryba2)، βB3 غلوبولين العدسة (crybb3)، غلوبولين العدسة βA1 (cryba1)، غلوبولين العدسة βA4 (cryba4)، غلوبولين العدسة α B (cryab)) على برك من RNA المستمدة من العلاجات MIA الثلاثة. محور X يدل متوسط ​​سجل   2 نسب ذكرت من قبل المجهرية، في حين يتم رسم القيم ddCt QPCR على المحور Y. لاحظ أن QPCR والتغيرات التعبير عن أفادت ميكروأري ترتبط إلى حد كبير عبر نماذج MIA الثلاثة.
الرقم الكامل وأسطورة (71 K)

كتعبير عن هذه الجينات غلوبولين العدسة ودرجة عالية من التنسيق، اخترنا فقط cryaa، cryba1 وcrybb1 لمزيد من التحليل QPCR باستخدام الحمض النووي الريبي من الفردية أدمغة الأجنة المعرضة للانفلونزا. تأكيد upregulation من النصوص غلوبولين العدسة التي لاحظها ميكروأري من خلال تحليل QPCR من الفردية عينات الحمض النووي الريبي الجنينية 36. نتائج العلاج الانفلونزا في زيادة كبيرة cryaa، cryba1 ومستويات النص crybb1 (cryaa: ddCt = 1.97، P = 0.001؛ cryba1: ddCt = 1.39، P = 0.01؛ crybb1: ddCt = 2.00، P = 0.0002) ( الشكل 4). ومع ذلك، وهذه البيانات تكشف أيضا عن التباين الملحوظ الفردية في الناجمة عن انفلونزا غلوبولين العدسة upregulation، والتي لا تتطابق مع الموقف الرحم من الأجنة (انفلونزا: SD = 2.8؛ المالحة: SD = 1.6). وهذا يدل على أن التعرض انفلونزا لا يؤثر على قدم المساواة كل العقول الجنينية يتعرض في كل السدود، والتي قد تساهم في تقلب السلوكي في نهاية المطاف.
الرقم 4.

غلوبولين العدسة التعبير هو متغير في العقول الفردية من الأجنة المعرضة للانفلونزا. التعبير عن غلوبولين العدسة α A (cryaa)، وجرى تقييم غلوبولين العدسة βA1 (cryba1) وcrybb1 بواسطة PCR الكمي (QPCR) عبر العقول الفردية من 36 الانفلونزا و36 الأجنة المالحة. يمثل كل رمز وفسفوغليسرات كيناز مستوى 1 (PGK1) -normalized التعبير الجيني في الدماغ الجنيني واحد. خط رمادي متقطع يدل على موثوقة عتبة الكشف نص كتبها QPCR. لاحظ upregulation من الجينات غلوبولين العدسة ثلاثة في المجموعة انفلونزا مقارنة مع الضوابط، وتباين كبير من مستويات التعبير غلوبولين العدسة بين أدمغة الأجنة المعرضة للانفلونزا.
الرقم الكامل وأسطورة (62 K)

upregulation الأسرة غلوبولين العدسة هو عابر

كما يتم upregulated الجينات الأسرة غلوبولين العدسة بشكل ملحوظ في كل من 3   ح التالية IL-6 و بولي (I: C) والعلاج في 3 أيام بعد العلاج الانفلونزا، وسألنا إذا استمرت هذه التغييرات التعبير في مختلف مراحل العمر من النسل. درسنا التعبير عن cryaa، cryba1 وcrybb1 في القشرة الأمامية والحصين من الجراء منذ 15 أسابيع = 12) من بولي (I: C) - والسدود المعالجة المالحة. لا نجد فرقا كبيرا بين هذه الجماعات في التعبير عن هذه الجينات. وعلاوة على ذلك، تم العثور على أي اختلاف في القشرة الأمامية بين القديم لمدة 6 أشهر (ن = 6) ذرية من saline-، ريلاينس اندستريز-6- وبولي (I: C) السدود المعالجة بالإثير. وبالمثل، في لفيف مختلفة من الفئران، ويعتبر أي اختلاف في التعبير غلوبولين العدسة في القشرة الأمامية وحصين بولي (I: C) - والسدود المعالجة المالحة = 15) في 12 شهرا من العمر. وبالتالي، فإننا نستنتج أن upregulation من الجينات غلوبولين العدسة لوحظ عبر نماذج MIA الثلاثة هو عابر.
غلوبولين العدسة مستوى التعبير يرتبط وزن المشيمة

MIA له تأثير قوي على التنمية، وبوساطة جزء على الأقل من هذا التأثير من خلال تأثير IL-6 الأمهات على المشيمة. 19، 20 لاختبار ما إذا كانت هناك علاقة بين آثار MIA على المشيمة وعلى دماغ الجنين، قمنا بقياس وزن المشيمة الأجنة الفردية من الظروف MIA الثلاثة ( الشكل 5). وانخفض متوسط ​​وزن المشيمة بشكل ملحوظ في كل المعاملات MIA ثلاثة بالمقارنة مع العلاج المالحة (انفلونزا: P = 0.00016، بولي (I: C): P = 0.03439، IL-6: P = 0.0041). وعلاوة على ذلك، ترتبط إلى حد كبير مستويات التعبير دماغ cryaa، cryba1 وcrybb1 يحددها QPCR مع انخفاض في متوسط ​​وزن المشيمة التي تم الحصول عليها لجميع الظروف (cryaa: ص = 0.85، P = 0.072؛ cryba1: ص = 0.72، P = 0.138؛ crybb1: ص = 0.92، P = 0.041، على التوالي). وهكذا، فإن استجابة من الجينات غلوبولين العدسة يتوافق بشكل وثيق مع درجة MIA.
الرقم 5.

ويرتبط غلوبولين العدسة التعبير مع وزن المشيمة. ترتبط الكمية PCR (QPCR) مستويات التعبير عن cryaa (الحمراء)، cryba1 (الخضراء) وcrybb1 (الأزرق) مع الأوزان المشيمة متوسط ​​عبر تفعيل المناعي للأم (MIA) مجموعات والضوابط. محور X يدل على حجم التغير التعبير تقاس ddCT (1Ct التغيير = 2 أضعاف) والمحور Y يصور متوسط ​​وزن المشيمة. الساحات دلالة معالجة المياه المالحة والماس دلالة بولي (I: C) معاملة، مثلثات دلالة IL-6 العلاج والدوائر تدل على علاج الانفلونزا. لاحظ أن متوسط ​​وزن المشيمة تختلف اختلافا كبيرا بين الضوابط وجميع العلاجات MIA الثلاثة، وأن حجم كل التغييرات التعبير غلوبولين العدسة يرتبط ارتباطا وثيقا وزن المشيمة.
الرقم الكامل وأسطورة (59 K)


أعلى الصفحة نقاش

هذه الدراسة من التأثيرات الحادة الناجمة عن MIA على Transcriptome على الدماغ الجنيني تكشف ما يلي: (1) كل ثلاثة علاجات MIA (الانفلونزا، بولي (I: C) وIL-6) استحضار قوية التعبير الجيني تغييرات في الدماغ الجنيني. (2) العلاجات MIA ثلاثة تسفر متنوعة فضلا عن تداخل التوقيعات Transcriptome على؛ (3) كل العلاجات MIA upregulate بقوة الأسرة غلوبولين العدسة الجينات، ممثلة α، β γ وأعضاء في الدماغ الجنيني؛ (4) upregulation من الجينات غلوبولين العدسة هو رد فعل حاد لا تستمر حتى سن البلوغ. و (5) ويرتبط مستوى غلوبولين العدسة التعبير الجيني مع درجة MIA مقاسا وزن المشيمة. بالإضافة إلى ذلك، لدينا أيضا بيانات تكشف عن التباين الملحوظ في الحث غلوبولين العدسة بين العقول الفردية في MIA نموذج الانفلونزا، مشيرا إلى أن هذا النوع من MIA لا يؤثر كل من الأجنة على قدم المساواة في كل السدود.
على الرغم من أننا نجد أن النماذج MIA الثلاث تتسبب في عدد من الجينات المشتركة، وهناك أيضا اختلافات كبيرة بين المجموعات. ويمكن أن يعزى ذلك جزئيا إلى الاختلافات في العمل الجزيئي للعوامل الاضطراب الثلاثة، وأيضا إلى الاختلافات في نقطة زمنية من الانفلونزا، وبولي (I: C) وIL-6 التعرض. كفاءة التعرض الانفلونزا ودوام المرض هو تحدي السيطرة عليها، واستجابة خلوى-تسبب الأنفلونزا هي تدريجية ويستغرق ايام لتطوير. النقطة الوقت الذي تم اختياره لIL-6 و بولي (I: C) حقن (E12.5) يحاكي ما يقرب من ذروة IL-6 تحريض التالية عدوى انفلونزا (E9.5). 10، 17 ومع ذلك، خلوى الاستقراء هو أطول أمدا العدوى التالية مما هو عليه لغيرها من اثنين من العلاجات. وبالمثل، فإن الآثار الجزيئية للبولي (I: C) مقابل IL-6 في 3   ساعة بعد التعرض قد لا يكون معادلا تماما، مما أدى في كل من التغييرات التعبير الجيني المشتركة والمتباينة في نقطة زمنية واحدة. وبالتالي، فإننا نعتقد أن البيانات الشاملة ويرى أن الخلافات Transcriptome على نلاحظ هي جزء من العملية نفسها، وتوفير "لقطات" الجزيئية للالكنسي، والتغيرات التعبير عابرة أن تتغير بسرعة. ومع ذلك، فإن أنماط التعبير الجيني المشترك عبر النماذج MIA ثلاثة من المرجح أن يؤدي إلى العجز السلوكية التي هي مشتركة في نسل كل العلاجات الثلاثة مثل تثبيط prepulse والتفاعل الاجتماعي واستكشاف حقل مفتوح. 10، 17 وتوفر هذه الإمكانية دافعا قويا لمواصلة متابعة الآثار المحتملة لهذه التقلبات جينات معينة على نمو الدماغ، مع التركيز بشكل أساسي على دور الأسرة غلوبولين العدسة الجينات.
أن ارتفاع التعبير غلوبولين العدسة الدماغ هو مشترك بين ثلاثة نماذج MIA الماوس ينسجم جيدا مع دراسات تنسب crystallins في التوحد البشري ومرض انفصام الشخصية. تم الكشف عن α تغير مستويات البروتين B-غلوبولين العدسة في القشرة الأمامية من الدماغ التوحد. 22 وبالإضافة إلى ذلك، يتم الإبلاغ عن الأجسام المضادة لمكافحة α B غلوبولين العدسة لتكون مرتفعة في مصل من الموضوعات التوحد مقارنة مع الضوابط. 23 وعلاوة على ذلك، تم الكشف عن التعبير زيادة α B-غلوبولين العدسة في ريت العقول متلازمة، 24 تم العثور على وα B-غلوبولين العدسة في الادراج في أدمغة المرضى الذين يعانون من متلازمة المرتبطة X الهزة / ترنح الهشة. 25 في الفصام، ورد التعبير غيرت كل -crystallin α و ميكرون-غلوبولين العدسة في القشرة الحزامية الأمامية 26 وقشرة الفص الجبهي. 27، 28 وتورط وعلاوة على ذلك، dysregulated مستويات غلوبولين العدسة الدماغ في مظهر من مظاهر مجموعة متنوعة من الاضطرابات العصبية، بما في ذلك مرض باركنسون ومرض الزهايمر والتصلب المتعدد ومرض كروتزفيلد جاكوب والمرض الكسندر. 29، 30، 31، 32، 33، 34، 35
على الرغم من أن الدور الدقيق للcrystallins في هذه الاضطرابات غير واضح، والدراسات في النماذج الحيوانية تشير إلى أن مستويات غلوبولين العدسة upregulated تخدم وظيفة اعصاب. ضرب α B-غلوبولين العدسة في مرض الزهايمر أو التجريبية الفئران التهاب الدماغ المناعة الذاتية يسبب الأعراض سوءا. 36، 37 هذه الآثار في الفئران التجريبية التهاب الدماغ المناعة الذاتية هي بدورها التخفيف من حدتها تسليم النظامية المؤتلف α B-غلوبولين العدسة، 37 كما هي آثار السكتة الدماغية التجريبية في الفئران. 38 وبالمثل، overexpression المعدلة وراثيا من α B-غلوبولين العدسة إلى التقليل من أعراض في نموذج الفأر من المرض ألكسندر، وهو اضطراب الاعصاب التنموي قاتلة منشؤها الخلايا النجمية. 39 وبالإضافة إلى ذلك، α A-غلوبولين العدسة المعارض آثار وقائية مضادة للالتهاب أفكارك في يسببها تجريبيا من العنبية، 40 والمعالجة مع كتل -crystallin α التي يسببها بشكل منتظم التهاب في الدماغ. 41
وقد أظهرت الدراسات الحديثة أنه، بالإضافة إلى الأدوار الكنسي على النحو المحرمين الجزيئي، crystallins تخدم مجموعة متنوعة واسعة من الوظائف الأخرى التي قد تكمن وراء أدوارهم وقائية في الجسم الحي. على سبيل المثال، ألفا A بوساطة غلوبولين العدسة-تثبيط كاسباس 3 تنقذ الخلايا العصبية الدوبامين-Pax6 نقص من موت الخلايا المبرمج. 42 وبالمثل، α B-غلوبولين العدسة يحمي من موت الخلايا فاس / APO-1 التي يسببها في المختبر. Crystallins يمكن أيضا منح العصبية عن طريق تحوير مستويات الكالسيوم حشوية. في شبكية العين βB2-غلوبولين العدسة، على سبيل المثال، colocalizes مع synaptotagmin 1، وجهاز استشعار الكالسيوم الأساسي، فضلا عن كالمودولين، وهو بروتين ملزمة الكالسيوم كبير، 43 والعديد من crystallins المرفأ الزخارف الرئيسية اليونانية أن عزل أيونات الكالسيوم. 44، 45، 46 ويعتقد أن وβB2-crystallins للتشاور قدرتها على تعزيز ثمرة neurite خلال إصلاح الشبكية - هذه الخصائص في α. 43، 47 طريقا آخر من النشاط غلوبولين العدسة هو من خلال تنظيم الاكسدة والاستجابات المناعية المرحلة الحادة. على سبيل المثال، α B-غلوبولين العدسة ينظم النشاط النووي عامل كيلوبايت بناء على حالة الفسفرة لها، 48 والمعالجة مع α B-غلوبولين العدسة يمنع التأثيرات السمية العصبية النووي عامل كيلوبايت يسببها. 49 وعلاوة على ذلك، α الإدارة B-غلوبولين العدسة في المختبر والمجراة downregulates نخر الورم α factor- والنيتريك سينسيز أكسيد في تنشيط الخلايا الدبقية الصغيرة. 50
ونظرا لهذا الأدب، وتحريض crystallins ردا على MIA يمكن أن ينظر إليه على أنه محاولة من الدماغ النامية لمواجهة التحدي الجهاز المناعي. الأهم من ذلك، upregulation غلوبولين العدسة نلاحظه في الأجنة ردا على MIA لا يمكن الكشف في الحصين والقشرة المخية الجبهية من الفئران المراهقين MIA المعاملة، مشيرا إلى أن غلوبولين العدسة الاستقراء هو عابر ومميزة من المرحلة الحادة من التعرض MIA. وعلاوة على ذلك، ومقارنة البيانات لدينا إلى الدراسات السابقة من Transcriptome على MIA ذرية يشير إلى أن التغييرات Transcriptome على دماغ الجنين والمراهق / الكبار لا نشارك قواسم مشتركة كبيرة. 17، 51، 52
بالإضافة إلى غلوبولين العدسة upregulation، يتم تغيير جينات عديدة أخرى في جميع النماذج الثلاثة من MIA اختبارها هنا. بالنسبة للبعض منهم (MIP، سي، tnnc2)، هناك معرفة كافية عن وظيفة البروتينات التي ترميز، مما يجعل من الصعب تصور أدوارها معينة في الدماغ، في حين من المرجح أن يلعب دورا هاما في الدماغ النصوص الأخرى التنمية. Aldh1a1 لاعب مهم في الضرر التأكسدي لأسباب بيئية، 53 وهذا قد يفسر upregulation القوي في هذه النماذج MIA. كما انزيم، ALDH1A1 يمارس دورا وقائيا الخلوية التي يتفاعل الألدهيدات شديدة التفاعل، بما في ذلك الأسيتالديهيد الإيثانول الأيض والمنتجات الرئيسية من بيروكسيد الدهون. ومن المعروف ALDH1A1 لتحويل ريتينالديهيد إلى حمض الريتينويك، وتغيير مستويات حمض الريتينويك في الدماغ قد يؤدي التطور العصبي الأمامي الخلفي العادية. 54 وبالمثل، يتم ترجمة ستيرول-C4-الميثيل مثل أوكسيديز البروتين (SC4MOL) إلى غشاء الشبكة الإندوبلازمية وغير يعتقد أن تشارك في التركيب الحيوي الكوليسترول في الدم، والتي عندما dysregulated ديه المظاهر السريرية في نمو الجهاز العصبي. 55 وبالإضافة إلى ذلك، homolog اهن 7 (atoh7) تشارك في تطوير العصب البصري. 56 لذلك، upregulation من هؤلاء الثلاثة الجينات، aldh1a1، sc4mol وatoh7، قد تمثل تحولا هاما في البيئة الجزيئية من الدماغ الجنينية التي يمكن أن تؤدي في التنمية العصبية الشاذة. وأخيرا، نجد أن مستويات التعبير عن العديد من الجينات مع أدوار معروفة في تنظيم دورة الخلية، وتطوير الخلايا العصبية والتمايز (على سبيل المثال، عامل النمو الذي يشبه الانسولين البروتين تعتمد على السيكلين كيناز 12، تعتمد على السيكلين كيناز 17، ملزمة 3، الخلية العصبية التصاق جزيء 1 و 2، وتحويل β2 عامل النمو، محول من ERBB2، 2، وهلم جرا) ترتبط إلى حد كبير مع التعبير عن crystallins (خلفية المادة 2).
نمط التعبير الجيني المشترك في مختلف العلاجات MIA، بالتزامن مع النتائج السابقة، ويرى أن IL-6 وسيطا هاما من MIA، وأن crystallins وسطاء الجزيئية الهامة من هذه العملية. وهذا يثير العديد من الأسئلة الهامة. أولا، هو IL-6 / سلسلة غلوبولين العدسة هدف واعد للتدخل الجزيئي في سياق الفصام والتوحد علاج أو الوقاية؟ الثانية، هي العلاجات المضادة للالتهابات المستخدمة حاليا (والتي تبشر كعلاج مساعد في مرض انفصام الشخصية) تحوير IL-6 / غلوبولين العدسة الطريق، وتعمل من خلال هذه الآلية؟ ثالثا، كيف يتم غلوبولين العدسة overexpression في الدماغ الجنيني تعطيل التطور الطبيعي، وأنه لا يغير من الاتصال نموذجي بين مناطق الدماغ النامية؟ وأخيرا، ما هو الإطار وقت حرج بالنسبة لتحوير IL-6 / غلوبولين العدسة مسار خلالها يمكننا عكس التأثيرات السلوكية الضارة للMIA؟ تبقى الإجابة على هذه الأسئلة الحرجة مجهولة في معظمها حتى الآن، وسوف يتعين الإجابة عليها من قبل تجارب المتابعة الشاملة.
عموما، استنادا إلى النتائج التي توصلنا إليها والآثار الجزيئية المعروفة crystallins، نقترح أن تحريض الجينات غلوبولين العدسة ردا على MIA هو محاولة اعصاب من الدماغ النامية لمواجهة الإجهاد البيئي. ومع ذلك، من المرجح أن يكون لها عواقب ضارة هذا الرد. ونظرا لأدوار إضافية في تمايز الخلايا العصبية والنمو محور عصبي، 42، 43 overexpression من crystallins (والجينات الأخرى مثل aldh1a1، sc4mol وatoh7) قد تقلب التوازن الحساس بين الخلايا العصبية والتمايز في الدماغ الجنيني. ويدعم بقوة هذا الرأي ملاحظة أن بولي (I: C) MIA يؤدي إلى انخفاض الحصين وتكوين الخلايا العصبية القشرية. 57، 58 ونقترح أيضا أنه بمجرد أن يختفي تنشيط جهاز المناعة، يستأنف البرنامج التنموي الدماغ العادي، ولكن مع فارق زمني. ونتيجة لذلك، وتشكيل طبقة في القشرة 59 يتم تبديل والاتصالات بين مناطق الدماغ المختلفة، مما يؤدي إلى تغييرات دائمة في الربط والكيمياء العصبية. 60 وهذا يؤدي في نهاية المطاف في مختلف الانحرافات السلوكية التي تم العثور عليها في نسل كل النماذج MIA الثلاثة. وأخيرا، فإننا نقول أيضا أن هذا سلسلة من الأحداث قد موازية الآليات التي الشتائم البيئية تسهم في خطر الاضطرابات العصبية النمائية مثل الفصام والتوحد.

أعلى الصفحة تضارب المصالح

الكتاب تعلن أي تضارب في المصالح.

أعلى الصفحة المراجع

  • براون AS، Derkits EJ. عدوى قبل الولادة وانفصام الشخصية: مراجعة الدراسات الوبائية ومتعدية. آم J الطب النفسي عام 2010؛ 167: 261-280. | المادة | مجلات | ISI |
  • Atladottir HO، تورسن P، أوسترغارد L، Schendel DE، Lemcke S، M عبد الله وآخرون. إصابة الأم تستدعي دخول المستشفى خلال فترة الحمل واضطرابات طيف التوحد. J التوحد ديف Disord 2010؛ 40: 1423-1430. | المادة | مجلات |
  • عبد الله MW، لارسن N، بستان J، Norgaard بيدرسن B، تورسن P، مورتنسن EL آخرون. كيموكينات الذي يحيط بالجنين السوائل واضطرابات طيف التوحد: دراسة استكشافية الاستفادة من الدنماركي تاريخية الفوج الميلاد. الدماغ Behav إمان 2012؛ 26: 170-176. | المادة | مجلات |
  • جوينز PE، Croen LA، براونشفايغ D، يوشيدا CK، Grether J، هانسن R وآخرون. زيادة midgestational IFN-غاما، IL-4 و IL-5 في المرأة تحمل طفلا يعانون من مرض التوحد: دراسة حالة للسيطرة. مول للتوحد 2011؛ ​​2: 13. | المادة | مجلات |
  • روزنبرغ RE، قانون JK، Yenokyan G، McGready J، كوفمان WE، PA القانون. خصائص والتوافق من اضطرابات طيف التوحد بين 277 أزواج التوأم. القوس Pediatr Adolesc ميد 2009؛ 163: 907-914. | المادة | مجلات | ISI |
  • Hallmayer J، كليفلاند S، توريس A، J فيليبس، كوهين B، Torigoe T وآخرون. التوريث الوراثي والعوامل البيئية المشتركة بين أزواج التوأم المصابين بالتوحد. قوس الجنرال الطب النفسي عام 2011؛ ​​68: 1095-1102. | المادة | مجلات |
  • باترسون PH. مشاركة المناعة في الفصام والتوحد: المسببات وعلم الأمراض والحيوان نماذج Behav الدماغ الدقة 2009؛ 204: 313-321. | المادة | مجلات | ISI | CAS |
  • فاطمي SH، Emamian ES، كيست D، سيدويل RW، ناكاجيما K، P أختر آخرون. عيب corticogenesis وانخفاض في ريلين reelin مناعية في القشرة والحصين من الفئران حديثي الولادة المصابين قبل الولادة. مول الطب النفسي 1999؛ 4: 145-154. | المادة | مجلات | ISI | CAS |
  • فاطمي SH، كوادرا AE، شرم فكهاني EE، سيدويل RW، Thuras P. قبل الولادة التهاب فيروسي يسبب تغييرات في nNOS التعبير في تطوير أدمغة فئران. NeuroReport 2000؛ 11: 1493-1496. | مجلات |
  • شي L، فاطمي SH، سيدويل RW، باترسون PH. أسباب الإصابة بالأنفلونزا الأمهات تميزت التغيرات السلوكية والدوائية في النسل. J Neurosci 2003؛ 23: 297-302. | مجلات | ISI | CAS |
  • Palmen SJ، فان Engeland H، هوف العلاقات العامة، والنتائج شميتز C. عصبية مرضية في التوحد. الدماغ 2004؛ 127 (الجزء 12): 2572-2583. | المادة | مجلات | ISI |
  • أمارال DG، شومان CM، نوردال CW. التشريح العصبي مرض التوحد. اتجاهات Neurosci 2008؛ 31: 137-145. | المادة | مجلات | ISI | CAS |
  • مورينو JL، KURITA M، هولواي T، وبيز J، Cadagan R، مارتينيز Sobrido L وآخرون. أنفلونزا الأمهات عدوى فيروسية يسبب تغييرات مثل الفصام من 5 HTA ومستقبلات mGlu في النسل البالغين. J Neurosci 2011؛ ​​31: 1863-1872. | المادة | مجلات | ISI | CAS |
  • ماير U، فيلدون J. علم الأوبئة يحركها النماذج الحيوانية النمو العصبي لمرض انفصام الشخصية. بروغ Neurobiol 2010؛ 90: 285-326. | المادة | مجلات |
  • باترسون PH. إصابة الأمهات والمشاركة المناعة في مرض التوحد. اتجاهات مول ميد 2011؛ ​​17: 389-394. | المادة | مجلات | ISI |
  • ماير U، Nyffeler M، S Schwendener، Knuesel الأول، يي BK، فيلدون J. قبل الولادة النسبية والمساهمات الأمهات بعد الولادة إلى ذات الصلة الفصام خلل كيميائي عصبي بعد في الرحم التحدي المناعي. Neuropsychopharmacology 2008؛ 33: 441-456. | المادة | مجلات |
  • سميث SE، لي J، K Garbett، Mirnics K، باترسون PH. تفعيل المناعي للأم يغير نمو مخ الجنين من خلال انترلوكين 6. J Neurosci 2007؛ 27: 10695-10702. | المادة | مجلات | ISI | CAS |
  • باركر-Athill E، D لوه، بيلي A، B GIUNTA، تيان J، Shytle RD وآخرون. مركبات الفلافونويد، وهي الوقاية قبل الولادة عن طريق استهداف JAK2 / STAT3 يشير إلى معارضة IL-6 / MIA التوحد المرتبطة بها. J Neuroimmunol 2009؛ 217: 20-27.
  • هسياو EY، باترسون PH. تفعيل الجهاز المناعي للأم يؤدي الى تغييرات الغدد الصماء في المشيمة عبر IL-6. الدماغ Behav إمان 2011؛ ​​25: 604-615. | المادة | مجلات |
  • مندل M، مرزوق AC، دونلي R، بونزيو NM. التحفيز المناعي للأم خلال فترة الحمل يؤثر على مناعة التكيف في الذرية لتعزيز تطوير خلايا TH17. الدماغ Behav إمان 2010؛ 25: 863-871.
  • جلوريوسو C، ساباتيني M، أنجر T، T هاشيموتو، مونتيجيا LM، لويس DA آخرون. خصوصية وتوقيت التغييرات Transcriptome على القشرة المخية الحديثة ردا على BDNF الاجتثاث الجين خلال مرحلة التطور الجنيني أو مرحلة البلوغ. مول الطب النفسي عام 2006؛ 11: 633-648. | المادة | مجلات | ISI | CAS |
  • التحقيقات بيكيت J. الحالي في أنسجة المخ التوحد البحوث. J التوحد ديف Disord 2001؛ 31: 521-527. | المادة | مجلات | ISI | CAS |
  • Vojdani A، كامبل AW، أنيانوو، E، Kashanian A، K بوك، Vojdani E. الأجسام المضادة إلى الخلايا العصبية محددة المستضدات في الأطفال الذين يعانون من التوحد: ممكن عبر التفاعل مع بروتينات دماغي المنشأ من الحليب، الكلاميديا ​​الرئوية والمكورات العقدية مجموعة A. J Neuroimmunol 2002؛ 129: 168-177.
  • Colantuoni C، جيون OH، حيدر K، Chenchik A، Khimani ه، نارايانان V وآخرون. التعبير الجيني التنميط في الدماغ بعد الوفاة متلازمة ريت: التفاضلية التعبير الجيني وتصنيف المريض. Neurobiol ديس 2001؛ 8: 847-865. | المادة | مجلات | ISI | CAS |
  • Iwahashi CK، ياسوي DH، وهو HJ، اليونانية CM، Tassone F، K Nannen وآخرون. تكوين البروتين من شوائب داخل النواة من FXTAS. الدماغ 2006؛ 129 (الجزء 1): 256-271. | المادة | مجلات | ISI | CAS |
  • مارتينز دي سوزا D، شميت A، R رودر، ليبار M، شنايدر Axmann T، Falkai P آخرون. اختلافات الجنس معين بروتيوم في القشرة الحزامية الأمامية من الفصام. J Psychiatr الدقة 2010؛ 44: 989-991.
  • أريون D، أنجر T، لويس DA، ليفيت P، دليل Mirnics K. الجزيئية لزيادة التعبير عن الجينات المتعلقة الوظيفة المناعية وكوصي في قشرة الفص الجبهي في الفصام. بيول الطب النفسي عام 2007؛ 62: 711-721. | المادة | مجلات | ISI | CAS |
  • ميدلتون FA، Mirnics K، Pierri JN، لويس DA، ليفيت P. التعبير الجيني التنميط يكشف عن تغيرات في المسارات الأيضية محددة في الفصام. J Neurosci 2002؛ 22: 2718-2729. | مجلات | ISI | CAS |
  • براك H، K ديل Tredici، Sandmann-كيل D، فرك U، شولتز C. الخلايا العصبية معربا عن بروتينات الحرارة صدمة في مرض باركنسون. اكتا Neuropathol 2001؛ 102: 449-454.
  • بايراموفيتش JJ، لاسمان H، فان Noort JM. التعبير عن alphaB-غلوبولين العدسة في الخلايا الدبقية خلال تطوير التقرحي في التصلب المتعدد. J Neuroimmunol 1997؛ 78: 143-151. | المادة | مجلات | ISI | CAS |
  • Stoevring B، O فانغ، كريستيانسن M. AlphaB-غلوبولين العدسة في السائل المخي الشوكي من مرضى التصلب المتعدد. كلين شيم اكتا 2005؛ 356: 95-101.
  • وتتعزز شينوهارا H، Inaguma Y، انتقل S، Inagaki T، كاتو K. ألفا B غلوبولين العدسة وHSP28 في قشرة الدماغ من المرضى الذين يعانون من مرض الزهايمر. J Neurol الخيال العلمي 1993؛ 119: 203-208. | المادة | مجلات | ISI | CAS |
  • Renkawek K، Voorter CE، بوسمان GJ، فان Workum FP، دي يونج WW. التعبير ألفا B-غلوبولين العدسة في مرض الزهايمر. اكتا Neuropathol 1994؛ 87: 155-160.
  • دبير DV، Trojanowski JQ، ريختر، ندسبرغ C، لي VM، فورمان MS. التعبير عن بروتين صغير للحرارة صدمة alphaB-غلوبولين العدسة في tauopathies يعانون من أمراض الدبقية. آم J Pathol 2004؛ 164: 155-166. | مجلات | CAS |
  • لوي J، ماكديرموت H، I بايك، Spendlove الأول، لاندون M، ماير RJ. ألفا B غلوبولين العدسة التعبير في الأنسجة غير عدسي وجود انتقائية في الهيئات إدراج ubiquitinated في الأمراض التي تصيب البشر. J Pathol 1992؛ 166: 61-68. | المادة | مجلات | CAS |
  • اوجها J، Karmegam RV، Masilamoni JG، تيري AV، Cashikar AG. العيوب السلوكية في كوصي نقص الفئران نموذج مرض الزهايمر. بلوس واحد 2011؛ ​​6: e16550.
  • عثمان SS، Tomooka BH، فان Noort JM، Wawrousek EF، أوكونور KC، Hafler DA آخرون. الدور العلاجي والوقائي لalphaB-غلوبولين العدسة في إزالة الميالين المناعة الذاتية. الطبيعة 2007؛ 448: 474-479. | المادة | مجلات | ISI | CAS |
  • أراك A، برونيل SE، روثبارد JB، تشن C، كو RM، بيريرا النائب وآخرون. زيادة النظامية من alphaB-غلوبولين العدسة يوفر فوائد علاجية اثنتي عشرة ساعة بعد السكتة الدماغية بداية طريق تحوير المناعة. بروك Natl أكاد العلوم الولايات المتحدة الأمريكية عام 2011؛ ​​108: 13287-13292. | المادة | مجلات |
  • هاجمان TL، Boelens WC، Wawrousek EF، عبث A. قمع GFAP سمية التي كتبها alphaB-غلوبولين العدسة في نماذج الماوس الكسندر المرض. همهمة مول جينيه 2009؛ 18: 1190-1199. | المادة | مجلات | CAS |
  • راو NA، Saraswathy S، وو GS، Katselis GS، Wawrousek EF، بهات S. ارتقى التعبير شبكية معينة من الحرارة صغير بروتين الصدمة، alphaA-غلوبولين العدسة، ويرتبط مع حماية مستقبلة للضوء في التهاب القزحية التجريبية. انفست Ophthalmol فيس الخيال العلمي 2008؛ 49 : 1161-1171.
  • Masilamoni JG، Jesudason EP، Baben B، Jebaraj CE، Dhandayuthapani S، جاياكومار R. الجزيئية كوصي ألفا غلوبولين العدسة يمنع الآثار الضارة للneuroinflammation. Biochim BIOPHYS اكتا 2006؛ 1762: 284-293. | مجلات | ISI | CAS |
  • نينكوفيتش J، بينتو L، Petricca S، Lepier A، J الشمس، ريجر MA آخرون. وPax6 عامل النسخ ينظم بقاء الخلايا العصبية الدوبامين البصلة الشمية عبر غلوبولين العدسة alphaA. نيورون 2010؛ 68: 682-694. | المادة | مجلات | CAS |
  • Liedtke T، Schwamborn JC، SCHROER U، ثانوس S. الاستطالة من المحاور خلال تجديد ينطوي على شبكية العين B2 غلوبولين العدسة بيتا (crybb2). خلية مول البروتيوميات 2007؛ 6: 895-907.
  • Jobby MK، شارما Y. تشير إلى عدسة betaB2- وbetaA3-crystallins ملزم الكالسيوم أن كل crystallins بيتا هي بروتينات ملزم الكالسيوم. FEBS J 2007؛ 274: 4135-4147.
  • راجيني B، Shridas P، سونداري CS، موراليدار D، Chandani S، F توماس وآخرون. الكالسيوم خصائص غاما غلوبولين العدسة ملزم: أيون الكالسيوم يربط على المفتاح اليوناني أضعاف بيتا غاما غلوبولين العدسة. J بيول كيم 2001؛ 276: 38464-38471.
  • شارما Y، راو CM، Narasu ML، راو SC، Somasundaram T، Gopalakrishna A وآخرون. الكالسيوم ايون ملزمة لdelta- وبيتا crystallins. وجود "EF-اليد" عزر في دلتا غلوبولين العدسة التي تسعف في أيون الكالسيوم ملزمة. J بيول كيم 1989؛ 264: 12794-12799.
  • وانغ YH، وانغ DW، وو N، وانغ Y، يين ZQ. ألفا غلوبولين العدسة يعزز الفئران النمو محوار الشبكية على ركائز المايلين في المختبر. العيون الدقة 2010؛ 45: 164-168.
  • أدهيكاري AS، سينغ BN، راو KS، راو الفصل M. AlphaB-غلوبولين العدسة، وهو بروتين الصدمة الحرارية الصغيرة، وينظم النشاط NF-kappaB في الطريقة التي تعتمد على الفسفرة ويحمي العضلات من myoblasts TNF-ألفا الناجم عن السمية الخلوية. Biochim BIOPHYS اكتا 2011؛ 1813: 1532-1542.
  • ستينمان L. ثلاثي الجزيئي في الانتكاس ومغفرة في التصلب المتعدد. نات القس IMMUNOL 2009؛ 9: 440-447. | المادة | مجلات | ISI | CAS |
  • وو N، وانغ YH، تشاو HS، ليو DN، يينغ X، يين ZQ آخرون. ألفا غلوبولين العدسة downregulates التعبير عن TNF-ألفا و iNOS من قبل الفئران تنشيط الخلايا الدبقية الصغيرة في شبكية العين في المختبر والمجراة. العيون الدقة 2009؛ 42: 21-28.
  • فاطمي SH، بيرس DA، بروكس AI، سيدويل RW. العدوى الفيروسية قبل الولادة في الماوس يسبب التعبير التفاضلية من الجينات في أدمغة الفأر ذرية: نموذج حيواني محتمل لمرض انفصام الشخصية ومرض التوحد. سنبس 2005؛ 57: 91-99. | المادة | مجلات | ISI | CAS |
  • آسيا والمحيط الهادئ L، بيراكي S، F Aronsson، Rosvall L، أجرن SO، Kristensson K وآخرون. التغييرات التعبير الجيني في أدمغة الفئران التي تعرضت لعدوى فيروس الأمهات. NeuroReport 2005؛ 16: 1111-1115.
  • اسين N، بيتمان JB، Estey T، Kuszak JR، النيص DW، Piatigorsky J وآخرون. وظائف متعددة والمضافة من ALDH3A1 وALDH1A1: النمط الظاهري إعتام عدسة العين والضرر التأكسدي العين في Aldh3a1 (- / -) / Aldh1a1 (- / -) الفئران خروج المغلوب. J بيول كيم 2007؛ 282: 25-25.
  • Duester G. الريتينويك تركيب الحامض والإشارات خلال توالد المبكر. الخليوي 2008؛ 134: 921-931. | المادة | مجلات | ISI | CAS |
  • انه M، KRATZ جنيه، ميشال JJ، فاييخو AN، فيريس L، كيلي RI آخرون. الطفرات في الجين البشري SC4MOL ترميز ستيرول الميثيل أوكسيديز سبب التهاب الجلد صدافية، صغر الرأس، وتأخر في النمو. J كلين استثمر 2011؛ ​​121: 976-984.
  • البني NL، Dagenais SL، تشن CM، وتوصيف جلاسر T. الجزيئية ورسم الخرائط من ATOH7، وهو homolog اهن البشري مع الدور المتوقع في تطوير الخلايا العقدية للشبكية. Mamm الجينوم 2002؛ 13: 95-101. | المادة | مجلات | ISI | CAS |
  • دي ميراندا J، K Yaddanapudi، Hornig M، G فيلار، سيرج R، يبكين WI. تحريض الحصانة تول مثل مستقبلات 3 بوساطة أثناء الحمل يمنع تكوين الخلايا العصبية القشرية ويسبب الاضطرابات السلوكية. MBio 2010؛ 1: e00176-10.
  • الذئب SA، ملنيك A، Kempermann G. زيادة ممارسة الرياضة البدنية تكوين الخلايا العصبية الكبار والنشاط تيلوميراز، ويحسن العجز السلوكية في نموذج الفأر من انفصام الشخصية. المخ Behav إمان 2011؛ ​​25: 971-980.
  • Soumiya H، Fukumitsu H، فوروكاوا S. قبل الولادة التحدي المناعي التنازلات تطوير الطبقة العليا ولكن ليس الخلايا العصبية طبقة أعمق من الماوس القشرة المخية. J Neurosci الدقة 2011؛ ​​89: 1342-1350.
  • دنغ MY، لام S، ماير U، فيلدون J لى Q، R وي آخرون. أمامي تحت القشرية البروتين التعبير التالي تعرض الجنين لالتهاب الأمهات. بلوس واحد 2011؛ ​​6: e16638.

 

__________________
استشارى الادوية الطبيعيه وباحث وخبير فى علاجات التوحد
رد مع اقتباس
  #36  
قديم 12-06-2015, 09:02 PM
رافت ابراهيم رافت ابراهيم غير متواجد حالياً
عضو ذهبي
 
تاريخ التسجيل: Dec 2011
المشاركات: 520
افتراضي الأم الأجسام المضادة الذاتية في التوحد

 

الأم الأجسام المضادة الذاتية في التوحد
http://archneur.jamanetwork.com/arti...icleid=1182176


الملخص | أدوار الحمل للأم IGG | إضافي الحمل جمعيات المناعة مع ASD | التوجهات المستقبلية | معلومات المادة | المراجع

ومع استمرار الدراسات الوبائية أن نلاحظ أن هناك زيادة ملحوظة في معدلات التوحد اضطراب طيف (ASD) التشخيص في جميع أنحاء العالم، وعدم وجود العوامل المسببة المحددة في معظم الحالات لا يزال عائقا رئيسيا في تطوير استراتيجيات العلاج والوقاية. وزادت الملاحظات المنشورة من تشوهات الجهاز المناعي في ASD مؤخرا، مع عدة مجموعات وتحديد البروتين الجنين الأجسام المضادة مفتش رد الفعل في البلازما من أمهات الأطفال المصابين بالتوحد. وعلاوة على ذلك، تم العثور على المعلمات المناعية الحمل الأخرى، بما في ذلك العدوى الأمهات وdysregulated إشارات خلوى، لتترافق مع ASD في بعض الحالات. في حين لا تزال الآليات المسببة للأمراض تفصيلية تحدد بعد، فرضية أن بعض حالات ASD قد تتأثر، أو حتى تسبب، عن طريق الأجسام المضادة في الدماغ رد الفعل الجنين الأمهات أو أخرى في الرحم التعرض المرتبطة بالمناعة هي منطقة نشطة للتحقيق. وتستعرض هذه المقالة الأدب الحالي في هذا المجال وتقترح عدة اتجاهات للبحث في المستقبل.

nnr110010f1.gif

الأرقام الواردة في هذه المادة

اضطرابات طيف التوحد (أي إس دي إس) هي الآن الاضطرابات العصبية النمائية شيوعا، مع وجود نسبة التشخيص من 1:88. الأفراد مع ASD عرض العاهات المتغيرة في التواصل والتفاعل الاجتماعي وقيدت المصالح التي تتجلى في كثير من الأحيان كما stereotypies المتكررة. ضمن ASD، يمكن للأفراد يجتمع عتبات التشخيص في جميع المجالات السلوكية 3، مما أدى إلى تشخيص اضطراب التوحد (AU)؛ في 1 أو 2 من المجالات 3 العائد في تشخيص ASD أو اضطراب اسبرجر. أو قد العاهات التي تختلف بما فيه الكفاية ليؤدي إلى تشخيص اضطراب الطفولة التفكك أو النمو المتفشي المتعلقة اضطراب لا ينص على خلاف ذلك. حاليا، يتم تشخيص هذه الاضطرابات السلوكية باستخدام أدوات مثل تشخيص التوحد مقابلة-Revised1 والجدول الزمني للمراقبة في تشخيص التوحد (2)، تقييم المعايير الموجودة في الدليل التشخيصي والإحصائي للاضطرابات العقلية (الطبعة الرابعة، مراجعة النص) 0.3 العمل هو جارية لإنتاج التشخيصية المحدثة والإحصائي للاضطرابات العقلية (الطبعة الخامسة)، الذي من المقرر أن يصدر مايو 20134، ومن المرجح أن الجمع بين الاتحاد الافريقي، ASD، اسبرجر اضطراب والطفولة اضطراب التفكك، وانتشارا التنموي اضطراب لا خلاف حاليا المحدد في فئة واسعة من ASD، والتي سوف تشمل تدابير من المتخصصين السريرية لشدة وكذلك المظاهر السريرية المرتبطة بها.

ونظرا لعدم وجود اختبارات تشخيصية الكيمياء الحيوية، وأنه من غير الواضح ما إذا كانت الأعراض الكامنة ASD تنبع من مسببات مختلفة أو تمثل مختلف مظاهر عوامل وراثية أو بيئية مماثلة. وقد دعمت بيانات من دراسات التوائم رابطة جينية قوية مع ASD على أساس ارتفاع التوافق التوأم الزيجوت، وكشفت شاشات الوراثية على نطاق واسع عوامل الخطر عديدة، 5 مع كل منخفض نسبيا انتفاذ، ودعم الفرضية القائلة بأن المظاهر السلوكية للASD قد يكون متقاربة نتيجة التدخل الجيني أو البيئي مع أي من عدد كبير من العمليات العصبية النمائية الحرجة. ومن المثير للاهتمام، وreport6 ​​مؤخرا يشير إلى أعلى من التوافق ذكرت سابقا بين التوائم ثنائي الزيجوت، مما أدى إلى تحديد نموذج أفضل مناسبا من خطر AU أن سمات مساهمة 55٪ من العوامل البيئية ومساهمة 37٪ من العوامل الوراثية. تم العثور خطر لتطوير التشخيص أوسع من ASD أن يكون توزيع متطابقة تقريبا من عوامل الخطر.

جهاز المناعة البشري تمتلك تقاسم المكونات الوراثية والبيئية، والاعتماد على التعرض للعوامل البيئية إبلاغ مظهر من مظاهر الإشارات والمستجيب وظائف المشفرة وراثيا. في سياق الحمل، الجهاز المناعي للأم لديه عبئا إضافيا من nonresponsiveness للأب وكذلك المضادات الجنين محددة، مع الحفاظ على صحة الأم والجنين. وبالتالي، يمكن اعتبار مكونات الجهاز المناعي للأم التي تعبر المشيمة إلى الجنين يكون التعرض للعوامل البيئية. في الواقع، يعتمد النمو العصبي للأجنة السليم في توقيت دقيق، ومستويات وظيفية، وتوطين التشريحي للعديد من الجزيئات مما يشير إلى أن يمكن تعديلها من قبل العوامل الخارجية التي يتعرض لها الجنين. واحد في الرحم العوامل البيئية التي تكتسب مزيدا من الاهتمام هو الأجسام المضادة مفتش الأمهات.
أدوار الحمل للأم IGG
الملخص | أدوار الحمل للأم IGG | إضافي الحمل جمعيات المناعة مع ASD | التوجهات المستقبلية | معلومات المادة | المراجع

تقدم المشيمة حاجزا انتقائية بشكل ملحوظ تسمح التغذية والمناعة العوامل لنقل لوضع الجنين، مع تقييد مرور الجزيئات الضارة المحتملة. بين مكونات الجهاز المناعي للأم التي تدخل حجرة الجنين، نقل الأجسام المضادة مفتش بتركيزات عالية ابتداء من حول midgestation، 7 بلغت ذروتها في تعميم مستويات مفتش في الأطفال حديثي الولادة التي تتجاوز تلك الموجودة في التداول الأمهات بسبب حديثي الولادة FC بوساطة مستقبلات النقل النشط عبر المشيمة. هذا مفتش، والتي هي الأم تماما في الأصل، ويعتقد لتوفير الوليد مع عابرة، مناعة وقائية على أساس التعرض البيئي للأم حتى يبلغ الطفل قادر على شن الاستجابة المناعية التكيفية. ومع ذلك، في حالات المناعة الذاتية الأمهات، مفتش تعترف البروتينات الذاتي يعبر أيضا المشيمة ويمكن أن تتداخل مع نمو الجنين كما هو الحال في الوهن العضلي الوبيل الأمهات، والتي يمكن أن تؤدي إلى عابرة حديثي الولادة الوهن العضلي gravis8 و، في حالات نادرة، وغالبا ما يكون مميتا اضطراب اعوجاج المفاصل متعدد congenita.9 بينما مثل هذه الظروف غير شائعة نسبيا ويتم مسح مفتش المخالف من التداول الرضيع خلال الأشهر 6 الأولى من الحياة، والحالات التي يغير مفتش العمليات التنموية الهامة يمكن أن يؤدي إلى عيوب دائمة. على سبيل المثال، في بعض الحالات من الأطفال حديثي الولادة ذأب حمامي، 10 الأجسام المضادة الأمهات المميزة التي تربط لالريباسي رو بروتين نووي ريبوزي، ومنع تشكيل القلب السليم في وضع الجنين، مما يتطلب جراحة تصحيحية في الأطفال حديثي الولادة.
المشيمة مفتش النقل وBBB تشكيل

يضاف طبقة أخرى من التعقيد إلى هذا النظام من قبل حاجز الدم في الدماغ (BBB). تتألف BBB في المقام الأول من منعطفات ضيقة البطانية وتقدم مرشح انتقائية لوسط الجهاز العصبي (CNS) مدخل إلى الخلايا والجزيئات من التداول الأوعية الدموية، مما يسمح فقط مكونات معينة للدخول ومنع عموما صول agents.11 التهابات على الرغم من أن مفتش يقتصر عادة من الجهاز العصبي المركزي الكبار، قد الوصول إلى وضع أهداف الدماغ قبل تشكيل كامل للBBB. توقيت التنمية BBB في الجنين complex12 وتطوير العقارات الإقصاء في المقام الأول ردا على WNT / β-catenin الإشارات من الخلايا النجمية المحيطة بالأوعية. تشارك العديد من الجزيئات يشير المرتبطة في هذا شلال، والعديد منها لديها المتغيرات الجينية التي قد تورطت كعوامل التوحد الحساسية. ومن بين هذه الجينات Engrailed 2، 13 التي تعمل على تنظيم حساسية لعوامل خارجية من التداول الأم التي تعبر المشيمة. هذه حساسيات الوراثية قد تكمن وراء آلية مشاركة الأجسام المضادة الأمهات في تطوير مرض التوحد.

بناء على مفهوم القابلية الوراثية لالزناد بوساطة المناعي للتنمية التوحد، وانخفاض القدرة على تقييد إنتاج أجسام مضادة ذاتية التفاعل، وبعبارة أخرى، فإن العجز في التسامح المناعي، قد تشكل الأساس لإنتاج الذاتي الأجسام المضادة على رد الفعل. مسار واحد أن يؤثر صيانة التسامح مع الذات بطريقة تعتمد على الجرعة هو MET مستقبلات التيروزين كيناز وما يرتبط بها من cascade.14،15 إشارات لها ومن المثير للاهتمام، وMET التعدد الوظيفي، الأمر الذي يؤدي إلى انخفاض مستويات البروتين، وارتبط مع التوحد في عدد studies.16- الوراثية مستقلة 18 وعلاوة على ذلك، عمل مؤخرا عن المختبر لدينا تشير إلى أن هذا التعدد ويرتبط بشكل كبير مع الأجسام المضادة الدماغ antifetal الأمهات وجدت في أمهات الأطفال الذين يعانون من autism.19

بدلا من ذلك، قد تنشأ الأجسام المضادة في الدماغ رد الفعل الجنين الأمهات في سياق الاستجابة المناعية للعدوى. في هذه الحالة، يمكن أن الحواتم على الممرض يثير إنتاج الأجسام المضادة في تكوين الجمعيات مع خطر الخلايا signal.20 B مع خصوصية مستقبلات للمستضدات الجنين غير المحتمل أن يتم القضاء عليه من خلال آليات التسامح المركزية بسبب الطبيعة المعزولة من المستضدات الجهاز العصبي المركزي. وقد أثبتت هذه الظاهرة من المحاكاة الجزيئية لترسيب أعراض الحمى الروماتيزمية بعد العدوى مع المجموعة (أ) streptococcus21 من خلال تحريض أجسام مضادة ذاتية التفاعل وخلايا T. اضطراب بوساطة المناعة الناتجة يسبب التهاب المتغير للجهاز العصبي المركزي، والمفاصل، والجلد، والقلب.






Did you mean: Regardless of the ontogeny of autism-associated maternal antibodies, there is a general consensus that the resulting pathogenic mechanism likely proceeds through 1 of 3 established mechanisms: (1) blockade or interference with the function of the target molecule 22; (2) acting as an agonist and activating a receptor or signaling cascade23; or (3) through the induction of inflammation and the consequent effects on CNS development (Figure).24 Image not available. View Large | Save Figure | Download Slide (.ppt) Figure. Schematic representation of maternal antibody-associated autism. A, Maternal antibodies that bind to fetal brain proteins may arise through (1) an immune response to a molecular mimic, (2) impaired tolerogenic mechanisms, or (3) alloimmunization to fetal antigens during a previous pregnancy. B, The placenta actively transports maternal IgG into fetal circulation from midgestation through parturition. C, Normally, the adult blood-brain barrier (BBB) excludes circulating IgG from the brain parenchyma, while the developing fetal brain is variably permissive to maternal IgG during gestation. The presence of maternal fetal brain–reactive IgG during critical windows of neurodevelopment appear capable of precipitating adverse offspring behavioral manifestations including autism. CNS indicates central nervous system. Maternal IgG and Neurodevelopment The fetal BBB is not yet fully formed during embryonic development and appears to be variably permissive to factors that enter the fetal circulation across the placenta, including IgG. Women with systemic lupus erythematosus, which is associated with autoantibodies recognizing both the N-methyl-D-aspartate receptor and double-stranded DNA, often have children with learning disabilities whereas children born to fathers with systemic lupus erythematosis do not, supporting a pathogenic role for the antibodies during fetal brain development. Studies in a murine systemic lupus erythematosus model of gestational antibody transfer reveal specific deposition of maternal anti– N-methyl-D-aspartate IgG in the developing neocortex at 60- to 70-fold higher concentration than in the maternal brain.23 Furthermore, on behavioral testing, offspring of mouse dams harboring such antibodies displayed impaired performance on a variety of behavioral tests that varied based on antibody titer. Maternal IgG in Autism Observational Studies. Interest in a possible association between maternal antibodies and ASD began with the observation that gestational exposure to fetal paternally derived lymphocyte antigens elicited an antibody response in some mothers, which was associated with pregnancy complications and autism in a small cohort (Table).25 These maternal antibodies, which caused complement-dependent cytotoxicity to lymphocytes of the child, were assumed to stem from exposure to paternal antigens during a previous pregnancy similarly to the genesis of anti-Rh antibodies. Table. Compiled Results of Observational and Behavioral Studies Associating Maternal Antibodies With Autisma Image not available. View Large | Save Table | Download Slide (.ppt) Based on some intriguing pilot work from Dalton et al,31 we began our search for an association between maternal autoantibodies and autism. Using samples from the Childhood Autism Risk from Genes and the Environment Study,33 a large case-control cohort recruited through the Children's Center for Environmental Health at the University of California, Davis, we went on to demonstrate IgG reactivity against fetal brain proteins at approximately 37 kDa and 73 kDa in plasma from 7 of 61 mothers (11.5%) of children with ASD but not in 62 mothers of typically developing children (P = .006) or 40 mothers of children with non-ASD developmental delay (P = .04).27 Zimmerman et al26 also performed a pilot study involving 11 mothers of children with autism and control mothers, examining maternal serum for autoantibodies to brain proteins derived from rats. Reactivity was observed to targets in rat prenatal (gestational day 18) but not to postnatal (day 8) or adult brain, which was not directed at previously identified neuronal targets of autoimmunity. Building on these findings, Singer et al29 highlighted that this reactivity is primarily to fetal and not adult brain proteins in a larger sample set, observing reactivity to a 36-kDa human fetal brain antigen in approximately 10% of mothers of children with autism vs 2% of control mothers (P = .04). The striking consistency between the outcomes of both the Braunschweig27 and Singer29 studies indicate that antibody reactivity to antigens at approximately 36 to 39 kDa and 73 kDa was significantly more prevalent among mothers of children with autism. Observed in approximately 10% to 12% of mothers of children with autism, this antibody reactivity is thus one of the most prevalent biomarkers for autism discovered to date. Furthermore, it is interesting to note that both studies found a significant association between maternal anti-fetal brain reactivity and having a child with a regressive form of autism, yielding P values of .002 and .03 to .04 in the Braunschweig27 and Singer29 studies, respectively. This observation may reflect a subset of ASD cases whose clinical course is related to maternal antibody exposure. To expand and confirm the previous findings, we have gone on to profile 560 additional mothers recruited into the Childhood Autism Risk from Genes and the Environment Study30 since our original report. To identify the expression timing of the fetal brain antigens, we tested maternal antibody reactivity to brain protein from 3 gestational ages in the Rhesus macaque. Observing the highest relative expression levels in late gestation (day 152), we screened our expanded cohort for maternal fetal brain–reactive antibodies. A refined Western blotting technique allowed us to resolve an additional band migrating near the 37-kDa band at approximately 39 kDa. The prevalence of maternal antibodies to the 37 kDa/73 kDa and 39 kDa/73 kDa bands remained the same as in our original study, and reactivity to the 37 kDa/73k Da band pair remained exclusive to mothers of children with autism. When compared with children with ASD whose mothers did not have maternal fetal brain–reactive antibodies, behavioral tests revealed that children with ASD with mothers harboring reactivity to the 37-kDa and 73-kDa bands had significantly impaired (P = .005) use of expressive language on the Mullen Scales of Early Learning,30,34 while children with ASD born to mothers with the 39-kDa and 73-kDa band patterns had significantly increased (P = .047) irritability scores on the Aberrant Behavior Checklist.30,35 These results support the hypothesis that maternal fetal brain–reactive antibodies may underlie certain behavioral features of some cases of ASD. A central critique of studies linking maternal fetal brain–reactive antibodies and ASD has been that blood collection for antibody determination typically occurs after a child's diagnosis and may represent antibody specificities that developed after the birth of the child. To address this issue, archived midpregnancy blood samples in a large case-control study were screened for reactivity toward the fetal brain. Findings from this study confirmed the gestational presence of maternal fetal brain–reactive antibodies more commonly among mothers of children with autism, particularly those recognizing the 39-kDa and 73-kDa antigens.28 Behavioral Models. Pioneering murine model studies described in 196836 demonstrated that human IgG is transferred across the mouse placenta and into fetal circulation. This observation, combined with the knowledge that several autoimmune disorders involve pregnancy complications, lead to the development of mouse models of gestational transfer of self-reactive IgG for lupus,37 fetal arthrogryposis,38 bullous pemphigoid,39 and epidermolysis bullosa acquisita.40 The possibility that maternal antibody transfer may precipitate neurologic disturbances in offspring led Dalton et al31 to perform a pilot study using intraperitoneal administration of serum from a mother of one child with autism and one child with a severe language delay into pregnant mice. After observing that IgG antibodies from this mother stained cerebellar Purkinje neurons, large brainstem neurons, and cells from a neuroblastoma line, the group went on to note significant reductions in exploratory behavior (P = .02) in juveniles and impaired motor control (P < .001). The behavioral manifestations were hypothesized to originate in the cerebellum, prompting nuclear magnetic resonance studies that observed reduced cerebellar metabolites (P < .05) in adults after in utero IgG exposure. The combination of cellular staining and altered offspring behavior seen in this study suggests, at least in this individual, that the noted behavioral consequences, which are reminiscent of features of ASD, may have originated from the direct actions of brain-reactive maternal antibodies. Despite the sophistication of rodent behavioral tests, the core features of autism are difficult to assess in such model systems. Furthermore, the kinetics of maternal-fetal IgG transfer differ markedly between mice and humans,41 with substantial variation in the neurodevelopmental processes occurring during maternal IgG exposure. To address some of these issues, Martin et al32 administered intravenous injections of purified pooled IgG from mothers of multiple children with autism or control mothers at 3 separate times spanning gestation. Reduced postweaning peer contact (P = .04) and increased nonsocial active behavior (P = .04) was observed among the offspring of dams treated with maternal AU IgG, while hyperactivity was observed during individual housing conditions (P = .01), suggestive of autism-related behavior. Furthermore, dramatic whole-body stereotypic behaviors were observed in the offspring of AU IgG–treated dams in both solo (P = .003-.01) and social (P = .01-.03) testing paradigms. These behaviors, which included repetitive back flipping and pacing, recapitulate some of the self-directed stereotypical actions characteristic of autism and were observed throughout the testing ages. Expanding these findings to a larger group of mothers of children with autism, Singer et al24 administered pooled, purified IgG from 63 mothers of children with autism to pregnant mice, following an intraperitoneal injection strategy. In agreement with previous findings, behavioral alterations were noted in the offspring of mice treated with autism-associated maternal IgG, including hyperactivity, increased anxiety, and decreased social interaction (all P < .001). The observation of increased numbers of microglia following the course of antibody administration suggests that their effects may be mediated through inflammatory processes initiated by antibody binding, a conclusion further supported by elevated brain-derived neurotrophic factor levels (P = .03). It is interesting to note that murine models of genetically determined behavioral disorders sharing some clinical overlap with ASD, such as fragile X and Rett syndromes,42 have yielded similar behavioral findings to those just described. These observations support the concept that the behavioral features characteristic of ASD may represent a convergent phenotype arising from a variety of factors, including immunologic, genetic, or environmental. Thus, the various model systems that recapitulate features of autism each shed light on sensitive processes that are necessary for proper neurodevelopment. ADDITIONAL GESTATIONAL IMMUNE ASSOCIATIONS WITH ASD ABSTRACT | GESTATIONAL ROLES OF MATERNAL IGG | ADDITIONAL GESTATIONAL IMMUNE ASSOCIATIONS WITH ASD | FUTURE DIRECTIONS | ARTICLE INFORMATION | REFERENCES Maternal infection and inflammation during pregnancy has long been known to negatively impact fetal development. Gestational rubella infection, particularly during the first trimester, often leads to congenital rubella syndrome, which manifests with severe behavioral consequences including mental retardation and autism43 as well as myriad physical abnormalities such as hydrocephaly and cardiac malformations. In much of the world, instances of congenital rubella syndrome have been effectively eliminated through rubella vaccination in the form of the measles, mumps, and rubella vaccine.44 Maternal inflammation during pregnancy resulting from other viral or bacterial infections has been linked with autism and schizophrenia in offspring and has been proposed to stem from altered cytokine signaling during pregnancy. This phenomenon has been extensively modeled in animal studies using lipopolysaccharide, a bacterial cell wall component that activates toll-like receptor 4, and poly I:C, a double-stranded RNA viral mimic that activates toll-like receptor 3.45 Both lipopolysaccharide and poly I:C initiate strong innate immune responses and induce production of the pro-inflammatory cytokine interleukin 6, which is known to induce placental inflammatory processes46 and has been shown to mediate the neurodevelopmental effects of gestational inflammation.47 It is possible that such inflammatory processes could be related to the production of maternal antibodies that recognize fetal antigens through maternal-fetal cross talk48 or that maternal antibody to antigen interactions may precipitate inflammation-induced neurodevelopmental alterations similarly to bacterial or viral challenge. FUTURE DIRECTIONS ABSTRACT | GESTATIONAL ROLES OF MATERNAL IGG | ADDITIONAL GESTATIONAL IMMUNE ASSOCIATIONS WITH ASD | FUTURE DIRECTIONS | ARTICLE INFORMATION | REFERENCES The dominant model of maternal antibody–associated autism maintains that pathogenic maternal antibodies initiate their effects through antigen recognition, thus making the identification of the target molecules of utmost importance. It is interesting to note that among the studies that have identified the presence of brain-reactive maternal antibodies among mothers of children with autism, most have observed bands of reactivity by Western blot in the 36 to 39 kDa range. Furthermore, the finding of increased relative antigen levels in preparations of fetal brain protein support the possibility that the antibodies recognize a developmentally regulated or fetal isoform that may simultaneously explain the behavioral manifestations in offspring as well as the lack of maternal symptoms. Of additional interest is that these maternal antibodies have been observed both in retrospective studies involving archived samples as well as in samples taken after child diagnosis around 3 years of age, suggesting that they are persistent in individuals who possess them. To our knowledge, no study to date has investigated whether subsequent children born to mothers with brain-reactive antibodies have a risk for developing autism that is higher than published familial recurrence rates of approximately 19%.49 Although only a subset of mothers of children with autism possesses brain-reactive antibodies and the children themselves do not appear to generate similar maternal fetal brain–reactive antibodies,50 the identification of the target antigens may also shed light on pathways whose perturbation from genetic polymorphism or environmental exposure lead to the behavioral outcome of autism. Advancements in treatment and management of established autoimmune diseases provide strategies for the potential prevention of the consequences of fetal exposure to autism-associated maternal antibodies.


بغض النظر عن تطور الجنين من الأجسام المضادة الأم ويرتبط التوحد، وهناك إجماع عام على أن الآلية المسببة للأمراض الناتجة من المرجح العائدات من خلال 1 من 3 الآليات المنشأة: (1) الحصار أو التدخل في وظيفة molecules22 المستهدفة؛ (2) القيام بدور ناهض وتفعيل مستقبلات أو يشير cascade23. أو (3) من خلال تحريض الالتهاب ويترتب على ذلك من آثار على التنمية CNS (الشكل) 0.24
الصورة غير متاحة.
عرض كبير | حفظ الشكل | تحميل الشرائح (.PPT)

الشكل. التمثيل التخطيطي من الأمهات المرتبطة الأجسام المضادة التوحد. A، أجسام الأمهات التي ترتبط البروتينات دماغ الجنين قد تنشأ من خلال (1) استجابة مناعية لالجزيئية تقليد، آليات مولد للتحمل (2) ضعف، أو (3) alloimmunization لمستضدات الجنين أثناء الحمل السابق. B، المشيمة ينقل بنشاط مفتش الأمهات إلى الدورة الدموية للجنين من midgestation خلال الولادة. C، عادة، حاجز الدم في الدماغ الكبار (BBB) ​​يستبعد تعميم مفتش من لحمة الدماغ، في حين أن دماغ الجنين النامي هو متساهل بنسب مختلفة لمفتش الأمهات أثناء الحمل. وجود الأم الجنين الدماغ التفاعلي مفتش خلال النوافذ الحرجة من النمو العصبي تظهر قادر على عجل المظاهر السلوكية ذرية سلبي بما في ذلك مرض التوحد. CNS يشير إلى الجهاز العصبي المركزي.
الأم مفتش والنمو العصبي

ليست بعد تشكيل BBB الجنين بشكل كامل أثناء التطور الجنيني ويبدو أن التساهل بنسب مختلفة إلى العوامل التي تدخل الدورة الدموية للجنين عبر المشيمة، بما في ذلك مفتش. المرأة مع الذئبة الحمامية الجهازية، الذي يرتبط مع الأجسام المضادة تعترف كل من مستقبلات N-ميثيل-D اسبارتاتي والحمض النووي المزدوج تقطعت بهم السبل، وغالبا ما يكون الأطفال الذين يعانون من صعوبات التعلم في حين أن الأطفال الذين يولدون لآباء مع ذأب حمامي لا، ودعم دور الممرض لالأجسام المضادة خلال نمو مخ الجنين. دراسات في نموذج الذئبة الحمامية الجهازية الفئران نقل الأجسام المضادة الحمل تكشف ترسب محدد من الأمهات مكافحة N-ميثيل-D اسبارتاتي مفتش في القشرة المخية الحديثة في تطوير 60- إلى 70 أضعاف تركيز أعلى مما كانت عليه في brain.23 الأم وعلاوة على ذلك، على اختبار السلوكي، ذرية السدود الماوس إيواء مثل هذه الأجسام المضادة عرض أداء ضعف على مجموعة متنوعة من الاختبارات السلوكية التي تختلف بناء على عيار الأضداد.
الأم مفتش في التوحد

الدراسات الرصدية. بدأ اهتمام في ارتباط محتمل بين الأجسام المضادة الأم وASD مع ملاحظة أن التعرض الحمل إلى الجنين مستضدات الخلايا اللمفاوية المستمدة أبويا أثارت استجابة الأجسام المضادة في بعض الأمهات، الذي كان مرتبطا مع مضاعفات الحمل والتوحد في المجموعة الصغيرة (الجدول) 0.25 هذه الأم الأجسام المضادة التي تسبب السمية الخلوية تكمل التي تعتمد على الخلايا الليمفاوية للطفل، وكان يفترض أن تنبع من التعرض لمستضدات الأبوية أثناء الحمل السابق على نحو مماثل لنشأة الأجسام المضادة لمكافحة ره.
جدول. النتائج المترجمة من الدراسات الرصدية والسلوكية ربط الأم الأجسام المضادة مع Autisma
الصورة غير متاحة.
عرض كبير | حفظ الجدول | تحميل الشرائح (.PPT)

استنادا إلى بعض العمل التجريبي للفضول من دالتون وآخرون، 31 بدأنا بحثنا عن وجود ارتباط بين الأجسام المضادة الأم والتوحد. باستخدام عينات من مخاطر التوحد في مرحلة الطفولة من الجينات ودراسة البيئة، 33 كبيرة فوج الحالات والشواهد المعينين عن طريق مركز الطفل للصحة البيئية في جامعة كاليفورنيا في ديفيز، وذهبنا إلى إظهار مفتش تفاعل ضد بروتينات مخ الجنين في حوالي الساعة 37 كيلو دالتون و 73 كيلو دالتون في البلازما من 7 من 61 الأمهات (11.5٪) من الأطفال الذين يعانون من التوحد ولكن ليس في 62 أمهات الأطفال النامية عادة (P = 0.006) أو 40 أمهات الأطفال الذين يعانون من عدم ASD-تأخر في النمو (P =. 04) القيام 0.27 زيمرمان وآخرون AL26 أيضا دراسة تجريبية تشمل 11 أمهات الأطفال المصابين بالتوحد ومراقبة الأمهات وفحص مصل الأم لتكوين أجسام مضادة للبروتينات الدماغ المستمدة من الفئران. وقد لوحظ التفاعل إلى أهداف في مرحلة ما قبل الولادة الفئران (يوم الحملي 18) ولكن ليس إلى ما بعد الولادة (اليوم 8) أو الدماغ الكبار، والتي لم تكن موجهة على أهداف العصبية التي تم تحديدها مسبقا من أمراض المناعة الذاتية.

بناء على هذه النتائج، المغني وآخرون al29 شدد على أن هذا التفاعل هو في المقام الأول إلى البروتينات مخ الجنين وليس الكبار في أكبر عينة مجموعة، ومراقبة تفاعل لمستضد دماغ الجنين البشري 36 كيلو دالتون في ما يقرب من 10٪ من أمهات الأطفال المصابين بالتوحد ضد 2 ٪ من الأمهات التحكم (P = 0.04). تناسق مدهش بين نتائج كل الدراسات Braunschweig27 وSinger29 تشير إلى أن الأجسام المضادة التفاعل لمستضدات على ما يقرب من 36 إلى 39 كيلو دالتون و 73 كيلو دالتون كان بشكل ملحوظ أكثر انتشارا بين أمهات الأطفال المصابين بالتوحد. لوحظ في حوالي 10٪ إلى 12٪ من أمهات الأطفال المصابين بالتوحد، هذه الأجسام المضادة للتفاعل وبالتالي واحدة من المؤشرات الحيوية الأكثر انتشارا لمرض التوحد اكتشفت حتى الآن. وعلاوة على ذلك، فإنه من المثير للاهتمام أن نلاحظ أن كلا الدراسات وجود علاقة ذات دلالة إحصائية بين الأمهات تفاعل الدماغ لمكافحة الجنين وإنجاب طفل مع شكل تراجعية التوحد، مما أسفر عن القيم P من 0،002 و0،03-0،04 في الدراسات Braunschweig27 وSinger29 ، على التوالي. وقد تعكس هذه الملاحظة مجموعة فرعية من الحالات ASD الذي يرتبط التعرض الأجسام المضادة الأمهات بطبيعة الحال السريرية.

لتوسيع وتأكيد النتائج السابقة، لقد ذهبت إلى لمحة 560 الأمهات إضافية تجنيدهم في خطر التوحد في مرحلة الطفولة من الجينات والبيئة Study30 منذ التقرير الأصلي لدينا. لتحديد توقيت التعبير عن مستضدات مخ الجنين، ونحن اختبار الأجسام المضادة للتفاعل الأمهات إلى بروتين المخ من 3 الأعمار الحملية في المكاك القرد. مراقبة أعلى مستويات التعبير النسبية في أواخر الحمل (يوم 152)، ونحن لدينا فحص فوج موسعة عن الأجسام المضادة في الدماغ رد الفعل الجنين الأمهات. سمحت تقنية النشاف الغربية المكررة لنا لحل الفرقة إضافية المهاجرة بالقرب من الفرقة 37 كيلو دالتون في حوالي 39 كيلو دالتون. ظل انتشار الأجسام المضادة الأمهات إلى 37 كيلو دالتون / 73 كيلو دالتون و 39 كيلو دالتون / 73 كيلو دالتون العصابات هي نفسها كما في دراستنا الأصلية، وبقي التفاعل إلى 37 كيلو دالتون / 73K دا الفرقة الزوج الحصري لأمهات الأطفال المصابين بالتوحد. بالمقارنة مع الأطفال الذين يعانون من التوحد الذي أمهات لم يكن لديهم الأجسام المضادة في الدماغ رد الفعل الجنين الأمهات، وكشفت الاختبارات السلوكية أن الأطفال الذين يعانون من التوحد مع الأمهات تؤوي التفاعل إلى 37 كيلو دالتون و 73 كيلو دالتون العصابات أعاق بشكل كبير (P = 0.005) استخدام اللغة التعبيرية على مولن الموازين من التعليم المبكر، 30،34 في حين أن الأطفال الذين يعانون من التوحد يولدون لأمهات مع كيلو دالتون 39 و 73 كيلو دالتون أنماط الفرقة قد ازداد بشكل ملحوظ (P = 0.047) عشرات التهيج على السلوك الشاذ Checklist.30، 35 وهذه النتائج تدعم الفرضية القائلة بأن الأجسام المضادة في الدماغ رد الفعل الجنين الأمهات قد تكمن وراء بعض الخصائص السلوكية لبعض حالات ASD.

A نقد المركزي من الدراسات التي تربط بين الأجسام المضادة في الدماغ رد الفعل الجنين الأمهات، وكان ASD أن جمع الدم لتحديد الأجسام المضادة يحدث عادة بعد تشخيص الطفل ويمكن أن تمثل خصوصيات الأجسام المضادة التي وضعت بعد ولادة الطفل. لمعالجة هذه القضية، كما تم عرض أرشفة عينات midpregnancy الدم في دراسة كبيرة للسيطرة على حالة لتفاعل نحو دماغ الجنين. وأكدت نتائج هذه الدراسة وجود الحمل من الأجسام المضادة في الدماغ رد الفعل الجنين الأمهات أكثر شيوعا بين أمهات الأطفال المصابين بالتوحد، ولا سيما الاعتراف كيلو دالتون 39 و 73 كيلو دالتون antigens.28

نماذج سلوكية. أظهرت الدراسات نموذج الفئران الرائدة هو موضح في 196836 أن مفتش البشري يتم نقلها عبر المشيمة والفأرة في الدورة الدموية للجنين. هذه الملاحظة، جنبا إلى جنب مع العلم أن العديد من اضطرابات المناعة الذاتية تنطوي على مضاعفات الحمل، يؤدي إلى تطوير نماذج الماوس لنقل الحمل من ذاتية التفاعل مفتش لمرض الذئبة، 37 اعوجاج المفاصل الجنين، 38 الفقعان الفقاعي و 39 و انحلال البشرة الفقاعي acquisita.40 إمكانية أن نقل الأجسام المضادة الأمهات قد يعجل اضطرابات عصبية في ذرية أدى دالتون وآخرون al31 لإجراء دراسة تجريبية باستخدام إدارة داخل الصفاق من المصل من أم لطفل واحد مع التوحد وطفل واحد مع تأخير لغة حادة في الفئران الحوامل. بعد أن لاحظت أن الأجسام المضادة مفتش من هذه الأم ملطخة الخلايا العصبية للدماغ العصبية، الخلايا العصبية الدماغ الكبيرة، وخلايا من خط العصبية، توجهت المجموعة على الإشارة إلى تخفيضات كبيرة في السلوك الاستكشافي (P = 0.02) في الأحداث والتحكم في المحركات ضعف (P < .001). ويفترض ان هذه المظاهر السلوكية أن تنشأ في المخيخ، مما دفع الدراسات النووية بالرنين المغناطيسي الذي لوحظ انخفاض الأيض المخيخ (P <0.05) في البالغين بعد في تعرض الرحم مفتش. مزيج من تلطيخ الخلوية والسلوك ذرية تغير ترى في هذه الدراسة تشير، على الأقل في هذا الشخص، أن العواقب السلوكية وأشار، التي تذكرنا ملامح ASD، ربما تكون قد نشأت من الإجراءات المباشرة للأجسام الأمهات في الدماغ رد الفعل.

على الرغم من التطور من الاختبارات السلوكية القوارض، المعالم الأساسية لمرض التوحد يصعب تقييم نظم نموذج من هذا القبيل. وعلاوة على ذلك، حركية نقل مفتش الأم والجنين تختلف بشكل ملحوظ بين الفئران والبشر، 41 مع اختلاف كبير في العمليات العصبية النمائية التي تحدث أثناء التعرض للمفتش الأمهات. لمعالجة بعض هذه القضايا، al32 مارتن وآخرون تدار الحقن في الوريد من تنقية المجمعة مفتش من أمهات الأطفال المصابين بالتوحد متعددة أو مراقبة الأمهات في 3 مرات منفصلة تمتد الحمل. وقد لوحظ انخفاض اتصال النظير تال للفطام (P = 0.04) وزيادة السلوك الغير اجتماعية نشطة (P = 0.04) بين ذرية السدود تعامل مع الأمهات AU مفتش، في حين لوحظ فرط النشاط خلال ظروف السكن الفردي (P = 0.01)، موحية من سلوكيات التوحد. وعلاوة على ذلك، لوحظ كامل الجسم السلوكيات النمطية كبيرة في ذرية السدود AU مفتش المعاملة في كلا منفرد (P = 0،003-0،01) والاجتماعية (P = 0،01-0،03) نماذج الاختبار. هذه السلوكيات، والتي شملت التقليب الظهر المتكررة وسرعة، ألخص بعض ذاتيين الإجراءات النمطية المميزة للمرض التوحد وشوهدت في جميع أنحاء اختبار الأعمار.

توسيع هذه النتائج إلى مجموعة أكبر من أمهات الأطفال المصابين بالتوحد، المغني وآخرون al24 يدار المجمعة، مفتش المنقى من 63 أمهات الأطفال المصابين بالتوحد على الفئران الحوامل، في أعقاب استراتيجية حقن داخل الصفاق. في اتفاق مع النتائج السابقة، لوحظت تغييرات سلوكية في ذرية الفئران التي عولجت مع المرتبطة بالتوحد مفتش الأمهات، بما في ذلك فرط النشاط، وزيادة القلق، وانخفض التفاعل الاجتماعي (جميع P <0.001). مراقبة الأعداد المتزايدة من الخلايا الدبقية الصغيرة لمتابعة مسار إدارة الأجسام المضادة تشير إلى أن آثارها قد توسطت من خلال العمليات الالتهابية التي بدأها الضد ملزمة، وهو استنتاج بدعم من جراء ارتفاع مستويات عامل التغذية العصبية المشتقة من الدماغ (P = 0.03).

ومن المثير للاهتمام أن نلاحظ أن نماذج الفئران من اضطرابات سلوكية مصممة وراثيا تقاسم بعض التداخل السريري مع ASD، مثل X الهش والمتلازمات ريت، 42 وقد أسفرت النتائج السلوكية مماثلة لتلك التي وصفها فقط. هذه الملاحظات تدعم فكرة أن السمات المميزة السلوكية للASD قد يمثل النمط الظاهري متقاربة الناشئة عن مجموعة متنوعة من العوامل، بما في ذلك جهاز المناعة، وراثية، أو البيئي. وبالتالي، فإن الأنظمة نموذج المختلفة التي ألخص ملامح التوحد تسليط كل الضوء على العمليات الحساسة التي هي ضرورية لنمو الجهاز العصبي السليم.
إضافية جمعيات المناعة الحمل مع ASD
الملخص | أدوار الحمل للأم IGG | إضافي الحمل جمعيات المناعة مع ASD | التوجهات المستقبلية | معلومات المادة | المراجع

المعروف منذ وقت طويل إصابة الأم والالتهابات خلال فترة الحمل لتؤثر سلبا على نمو الجنين. عدوى الحصبة الألمانية أثناء الحمل، وخصوصا خلال الأشهر الثلاثة الأولى، وغالبا ما يؤدي إلى متلازمة الحصبة الألمانية الخلقية، الذي يظهر مع عواقب سلوكية خطيرة بما في ذلك التخلف العقلي وautism43 وكذلك التشوهات الجسدية لا تعد ولا تحصى مثل التشوهات موه الرأس والقلب. في كثير من بلدان العالم، وقد تم القضاء حالات متلازمة الحصبة الألمانية الخلقية بشكل فعال من خلال تطعيم الحصبة الألمانية في شكل الحصبة، النكاف، والحصبة الألمانية ارتبط vaccine.44 التهاب الأمهات أثناء الحمل الناتج عن العدوى الفيروسية أو البكتيرية الأخرى مع مرض التوحد والفصام في ذرية واقترحت أن تنبع من تغييرها إشارات خلوى خلال فترة الحمل. تم عرض هذه الظاهرة على غرار نطاق واسع في الدراسات الحيوانية باستخدام lipopolysaccharide في والبكتيرية مكون جدار الخلية التي ينشط مثل عدد مستقبلات 4، وبولي I: C، وهو تقليد الفيروسي RNA المزدوج تقطعت بهم السبل التي ينشط مثل عدد مستقبلات 3.45 كلا lipopolysaccharide في وبولي I : C استحداث الاستجابات المناعية القوية الفطرية وتحفز إنتاج خلوى انترلوكين الموالية للالتهابات 6، والذي يعرف للحث على processes46 التهابات المشيمة ولقد ثبت للتوسط في الآثار العصبية النمائية من inflammation.47 الحمل فمن الممكن أن مثل هذه العمليات الالتهابية يمكن أن يكون المتعلقة بإنتاج الأجسام المضادة الأمهات التي تعترف المستضدات الجنين من خلال talk48 عبر الأم والجنين أو أن الأجسام المضادة الأمهات لمستضد التفاعلات قد يعجل الناجم عن التهاب التعديلات العصبية النمائية على نحو مماثل لتحدي بكتيرية أو فيروسية.
التوجهات المستقبلية
الملخص | أدوار الحمل للأم IGG | إضافي الحمل جمعيات المناعة مع ASD | التوجهات المستقبلية | معلومات المادة | المراجع

النموذج السائد من الأمهات المرتبطة الأجسام المضادة التوحد يحافظ أن الأجسام المضادة الأمهات المسببة للأمراض الشروع آثارها من خلال التعرف على المستضد، مما يجعل التعرف على الجزيئات المستهدفة من أهمية قصوى. ومن المثير للاهتمام أن نلاحظ أنه من بين الدراسات التي حددت وجود الأجسام المضادة الأمهات في الدماغ التفاعل بين أمهات الأطفال المصابين بالتوحد، لاحظت معظم عصابات من التفاعل من قبل لطخة غربية في 36-39 نطاق كيلو دالتون. وعلاوة على ذلك، فإن النتيجة زيادة مستويات مستضد النسبية في الأعمال التحضيرية للبروتين دماغ الجنين دعم إمكانية أن الأجسام المضادة تعترف على شكل الإسوي ينظم تنمويا أو الجنين الذي قد يفسر في وقت واحد المظاهر السلوكية في النسل فضلا عن عدم وجود أعراض الأمهات. حصة إضافية هو أن هذه الأجسام المضادة الأمهات وقد لوحظ في كل من دراسات بأثر رجعي تشمل عينات المحفوظة وكذلك في عينات أخذت بعد تشخيص الطفل حوالي 3 سنوات من العمر، مما يشير إلى أنها مستمرة في الأفراد الذين يملكونها. على حد علمنا، لم تتطرق أي دراسة حتى الآن ما إذا كان الأطفال الذين يولدون لأمهات لاحق مع الأجسام المضادة في الدماغ رد الفعل لديهم خطر الإصابة بمرض التوحد الذي هو أعلى من الأسعار المعلنة تكرار العائلية ما يقرب من 19٪ 0.49 على الرغم من أن مجموعة فرعية فقط من أمهات الأطفال ذوي التوحد يمتلك الأجسام المضادة في الدماغ رد الفعل والأطفال أنفسهم لا تظهر لتوليد الأجسام المضادة في الدماغ رد الفعل الجنين الأمهات مماثلة، 50 التعرف على المستضدات الهدف يمكن أيضا تسليط الضوء على مسارات التي من تعدد الأشكال الجيني أو الرصاص التعرض البيئي لنتائج السلوكية للاضطراب مرض التوحد. التقدم في معالجة وإدارة أمراض المناعة الذاتية التي أنشئت توفر استراتيجيات للوقاية المحتملين من مغبة تعرض الجنين إلى الأم الأجسام المضادة المرتبطة بالتوحد

 

__________________
استشارى الادوية الطبيعيه وباحث وخبير فى علاجات التوحد
رد مع اقتباس
  #37  
قديم 12-07-2015, 12:15 AM
رافت ابراهيم رافت ابراهيم غير متواجد حالياً
عضو ذهبي
 
تاريخ التسجيل: Dec 2011
المشاركات: 520
افتراضي آثار العلاج بالأكسجين تحت الضغط على الاكسدة، والالتهابات، والأعراض في الأطفال المصابين بالتوحد: دراسة تجريبية المفتوح التسمية

 

http://www.biomedcentral.com/1471-2431/7/36/

خلفية

في الآونة الأخيرة، ازداد العلاج بالأكسجين تحت الضغط (HBOT) في شعبية كعلاج لمرض التوحد. توثق العديد من الدراسات الاكسدة والالتهاب لدى الأفراد المصابين بالتوحد. وقد أثبتت كل من هذه الشروط التحسن مع HBOT، جنبا إلى جنب مع تعزيز وظيفة الجهاز العصبي والأداء الإدراكي. في هذه الدراسة، تم علاج الأطفال الذين يعانون من التوحد مع HBOT في ضغوط وتركيز الأكسجين في الغلاف الجوي في الاستخدام الحالي لهذا الشرط. تم قياس التغيرات في علامات الإجهاد التأكسدي والالتهاب. تم تقييم الأطفال لتحديد الآثار السريرية والسلامة.
طرق

خضع ثمانية عشر الأطفال المصابين بالتوحد الذين تتراوح أعمارهم بين 3-16 سنوات، 40 جلسات الضغط العالي من 45 دقيقة مدة كل منها إما 1.5 الاجواء (ATM)، و 100٪ من الأكسجين، أو عند 1.3 أجهزة الصراف الآلي و 24٪ أكسجين. قياسات بروتين سي التفاعلي (CRP) وعلامات الاكسدة، بما في ذلك البلازما الجلوتاثيون المؤكسد (GSSG)، تم تقييم بالصوم الدم السحوبات التي تم جمعها قبل وبعد 40 العلاجات. التغييرات في الأعراض السريرية، كما صنفت من قبل الآباء والأمهات، تم تقييم أيضا. تم رصدها الأطفال عن كثب بحثا عن الآثار الضارة المحتملة.
النتائج

عند نقطة نهاية 40 جلسات الضغط العالي، أظهرت أيا من هذه المجموعات إحصائيا تغييرات كبيرة في متوسط ​​مستويات GSSG البلازما، مشيرا إلى الاكسدة داخل الخلايا يبدو غير متأثر إما نظام. كان هناك اتجاه نحو التحسن في متوسط ​​CRP الحالي في كل من المجموعتين. وقد لوحظت أكبر التحسينات في الأطفال الذين يعانون من المرتفعات في البداية في CRP. عندما كان يتم تجميع جميع الأطفال 18، تم العثور على تحسن كبير في CRP (ع = 0.021). أشارت قبل والملاحظات بعد الأبوية تحسينات ذات دلالة إحصائية في كلا المجموعتين، بما في ذلك الدافع، والكلام، والوعي المعرفي (P <0.05). لم يلاحظ أي أحداث سلبية كبيرة.
الخلاصة

في هذه الدراسة التجريبية المحتملين من الأطفال الذين يعانون من التوحد، HBOT عند ضغط الحد الأقصى من 1،5 أجهزة الصراف الآلي مع ما يصل الى 100٪ من الأكسجين وآمن وجيد التحمل. لم HBOT لا تتفاقم بشكل ملحوظ الاكسدة وانخفاض التهاب مقاسا مستويات بروتين سي التفاعلي بشكل كبير. ملاحظات الوالدين تدعم روايات من تحسن في عدة مجالات التوحد. ومع ذلك، لأن هذا كان دراسة المفتوح التسمية، وبيانات نهائية بشأن فعالية HBOT لعلاج الأفراد المصابين بالتوحد يجب أن ننتظر النتائج من مزدوجة التعمية، والمحاكمات التي تسيطر عليها.
التسجيل محاكمة

clinicaltrials.gov NCT00324909
خلفية

التوحد هو اضطراب النمو العصبي يؤثر حاليا ما يصل الى 1 من 150 شخص في الولايات المتحدة [1]. يتميز مرض التوحد من خلال ضعف في التفاعل الاجتماعي، وصعوبة التواصل مع والسلوكيات المقيدة والمتكررة [2]. التوحد تقليديا يعتبر "ثابت" اضطراب عصبي [3] والتحسينات في ملامح التوحد الأساسية ليست شائعة [4، 5]. وعلاوة على ذلك، تظهر ثلاث دراسات وبائية أجريت بدقة أن انتشار مرض التوحد قد ازداد في السنوات الأخيرة [+6 - +8]. هذه الحقائق قد يفسر لماذا آباء وأمهات الأطفال المصابين بالتوحد هم أكثر عرضة للحصول على العلاجات الطبية البديلة وخارج التسمية من أولياء أمور الأطفال في عموم السكان [9]. واحد علاج خارج التسمية التي زادت مؤخرا شعبية كعلاج لمرض التوحد هو العلاج بالأكسجين تحت الضغط (HBOT) [10، 11]. تقليديا، HBOT ينطوي على استنشاق تصل إلى 100٪ الأكسجين تحت ضغط أكبر من الغلاف الجوي (ATM) في غرفة الضغط [12]. معظم مؤشرات نموذجية لHBOT تنطوي على استخدام ضغوط الضغط العالي فوق 2.0 أجهزة الصراف الآلي. مطلوبة الضغوط في الغلاف الجوي أعلى عموما لعلاج أمراض مثل التسمم بأول أكسيد الكربون وتحسين التئام الجروح [12، 13].
في بعض الدراسات، واستخدام الأوكسجين ويبدو أن تعزيز وظيفة الجهاز العصبي. على سبيل المثال، في مزدوجة التعمية، وهمي تسيطر عليها، دراسة عبر أكثر من، إدارة الأكسجين في الشباب الأصحاء، بالمقارنة مع هواء الغرفة، وقد تجلى لتحسين الأداء المعرفي، بما في ذلك تحسين الأداء على الاهتمام، رد فعل مرات، وكلمة استدعاء [14]. بالإضافة إلى ذلك، في المرضى المسنين، HBOT في 2.5 ضغط جوي و 100٪ أكسجين، بالمقارنة مع مجموعة المراقبة، وتحسين الوظيفة الإدراكية، بما في ذلك الذاكرة [15]. بسبب هذه النتائج، وقد استخدمت بعض المحققين HBOT لعلاج بعض الاضطرابات العصبية، بما في ذلك إصابات الدماغ المزمنة والمؤلمة [16 - 22]، وكذلك متلازمة الكحول الجنينية [23]، ولقد لوحظ تحسن السريرية في هؤلاء المرضى. وعلاوة على ذلك، في نموذج الفئران مؤخرا من إصابات في الدماغ، والمعاملة مع HBOT في 1.5 ضغط جوي و 100٪ أكسجين، بالمقارنة مع مجموعة الهواء نظامي الضغط المعالجة الصورية، وتحسين التعلم والذاكرة المكانية [24]. العديد من الدراسات، وذلك باستخدام HBOT في ضغوط مماثلة، أظهرت أيضا تحسينات السريرية في بعض المرضى الذين يعانون من الشلل الدماغي (CP) [+25 - 28] أنه في بعض الحالات كانت مثيرة [29]؛ ومع ذلك، فقد شكك بعض الباحثين نتائج هذه الدراسات ودعا للمحاكمات التي تسيطر عليها أبعد من ذلك والتركيز على تحديد آلية عمل HBOT في الأشخاص الذين يعانون CP [30]. ومن المهم أن نلاحظ أن بعض هذه الدراسات [16، 21 - +24، 26] تستخدم أقل الضغوط الضغط العالي (1.5 ضغط جوي أو أقل) من الضغوط التي تستخدم عادة لمعظم المؤشرات السريرية [13]. بالنظر إلى هذه الخلفية، وقد طبقت بعض الأطباء أيضا الضغوط الضغط العالي أقل مماثلة من 1،3-1،5 أجهزة الصراف الآلي في الأفراد الذين يعانون من التوحد، مع تركيزات الأكسجين تتراوح ما بين 21٪ إلى 100٪ [10، 31].
ويعتبر HBOT للأطفال بصفة عامة آمنة، حتى في الضغوط من 2.0 أجهزة الصراف الآلي لمدة 2 ساعة في اليوم [32]. ومع ذلك، على حد علمنا، وسلامة HBOT للأطفال الذين يعانون من التوحد لم يتم دراستها سابقا؛ مراجعة MEDLINE يشير إلى أن عدم وجود دراسات مستقبلية حول استخدام HBOT لمرض التوحد. ومع ذلك، وهناك تقارير غير مؤكدة من التحسينات السريرية في علاج الأطفال المصابين بالتوحد مع الضغط العالي التي تم الإبلاغ عنها من قبل بعض الأطباء. على سبيل المثال، هيوسير وآخرون. يعامل طفل في الرابعة من العمر يعانون من مرض التوحد استخدام العلاج الضغط الزائد عند 1.3 أجهزة الصراف الآلي و 24٪ أكسجين وذكرت صحيفة "تحسنا مدهشا في السلوك بما في ذلك الذاكرة والوظائف الإدراكية" بعد عشر جلسات فقط. وكان هذا الطفل أيضا تحسن ملحوظ من انسياب الدم الدماغي مقاسا واحدة فوتون انبعاث التصوير المقطعي (SPECT) بالاشعة قبل الضغط العالي والضغط العالي وظيفة [31]. اقترحت سلسلة أخرى قضية العلاج الضغط العالي في 1.3 ضغط جوي أدى إلى تحسينات السريرية في ستة أطفال المصابين بالتوحد [10].
استعراض الفيزيولوجيا المرضية وجدت في بعض الأفراد الذين يعانون من التوحد بالتعاون مع آليات عمل HBOT تؤدي إلى تكهنات بأن HBOT قد تنتج التحسينات السريرية في الأفراد المصابين بالتوحد [11]. العديد من الدراسات تشير إلى أن بعض الأفراد الذين يعانون من التوحد يعبر عن نقص انسياب الدم الدماغي [+33 - +35]، neuroinflammation [+36 - 38]، والتهاب المعدة والأمعاء [39، 40]. HBOT قد استدراك بعض من هذه المشاكل من خلال تحسين انسياب الدم الدماغي [17، 21، 31، 41]، وعن طريق خفض neuroinflammation والتهاب المعدة والأمعاء [+42 - +47]. ومع ذلك، فقد درست توجد دراسات مستقبلية دور HBOT على الالتهاب ونقص انسياب الدم في الدماغ لدى الأشخاص الذين يعانون من التوحد.
وعلاوة على ذلك، توجد مخاوف من أن HBOT قد تزيد الاكسدة عن طريق إنتاج أنواع الاكسجين التفاعلية [48]. هذه المخاوف هي ذات الصلة وخاصة لأن بعض الأطفال المصابين بالتوحد التعبير عن دليل على زيادة الاكسدة [49] بما في ذلك انخفاض مستويات الجلوتاثيون في الدم [50، 51]، وانخفضت أنشطة الإنزيمات المضادة للأكسدة بما في ذلك الفائق الفائق (الاحمق) [52]، الجلوتاثيون [52]، الكاتالاز [53]، وباراأوكسينيز paraoxinase، وهو الانزيم الذي يمنع أكسدة الدهون وأيضا يعطل السموم الفوسفات العضوي في البشر [54]. يظهر بعض الأطفال المصابين بالتوحد أيضا دليل على زيادة بيروكسيد الدهون [53، 55، 56]. وهذا يشمل زيادة malondialdehyde الذي هو علامة من الاكسدة وبيروكسيد الدهون [57]. مراجعة الأدبيات تشير إلى أن يمكن أن يحدث الاكسدة مع HBOT لكن يبدو أن أقل من القلق إزاء الضغوط الضغط العالي تحت 2.0 أجهزة الصراف الآلي [58]. في الواقع، مع المدى الطويل والإدارة المتكررة، HBOT أقل من 2.0 ضغط جوي يمكن أن تقلل فعليا الاكسدة [+59 - 61] عن طريق الحد من تأكسد الدهون [62]، ونشاط الأنزيمات المضادة للأكسدة بما فيها الهيئة العامة للسدود والتنظيم حتى [60، 63]، الجلوتاثيون [64]، الكاتالاز [65]، وباراأوكسينيز paraoxinase [62، 66]. وعلاوة على ذلك، في الضغوط التي تناولتها هذه الدراسة الحالية (1،3-1،5 ATM)، فشل البحث في الأدب لتحديد أي دراسات تشير إلى أن الاكسدة سوءا مع HBOT.
بدلا من ذلك، تشير بعض الأدلة على أن HBOT يمكن أن تخفف فعليا الاكسدة في الأطفال الذين يعانون من التوحد. على سبيل المثال، خفض تركيزات الأكسجين على متطوعين أصحاء العادي يؤدي إلى نقص الأكسجين النسبي ويزيد في الواقع الاكسدة [67]. هناك العديد من الدراسات التي تثبت الأدلة من نقص الأكسجة الدماغية، مقاسا انخفاضا في الدماغ بي سي إل 2، وزيادة في البروتين p53 الدماغ، لدى بعض الأفراد الذين يعانون من التوحد [+68 - +71]. ويتسبب ارتفاع البروتين p53 التي كتبها نقص الأكسجة [72] وانخفاض في بي سي إل 2 يرتبط بزيادة موت الخلايا المبرمج الناجمة عن نقص الأكسجة [73]. لذلك، من الناحية النظرية، وتحسين المناطق نقص الأوكسجين في الدماغ التوحد قد خفض التوتر التأكسدي. ومع ذلك، فإن آثار HBOT على الاكسدة في الأفراد المصابين بالتوحد غير معروفة. على حد علمنا، لم تكن هناك أي دراسات أجريت والتي تدرس دور HBOT على الاكسدة في الأطفال الذين يعانون من التوحد.
تناولت هذه الدراسة علاج الضغط العالي عند أدنى مستوى وينتهي عالية من نطاقات ضغط جوي وتركيزات الأكسجين المستخدمة حاليا في الأشخاص الذين يعانون من مرض التوحد: 1.3 أجهزة الصراف الآلي و 24٪ أكسجين [31]، و 1.5 ضغط جوي و 100٪ من الأكسجين. كانت هذه الدراسة عدة أهداف. أولا، منذ وجدت زيادة الاكسدة في بعض الأطفال الذين يعانون من التوحد، تم قياس آثار HBOT على علامات الإجهاد التأكسدي قبل وبعد 40 علاجات الضغط العالي. ثانيا، تم العثور على أدلة على زيادة الالتهاب في العديد من الأفراد الذين يعانون من التوحد. ومن المعروف HBOT أيضا أن يكون لها تأثيرات مضادة للالتهابات. لذلك، تم قياس تأثير HBOT على علامة التهابات (بروتين سي التفاعلي). ثالثا، لأن فعالية HBOT في التوحد لم يتم تقييمها من قبل، وتناولت هذه الدراسة الحالية الطيار المفتوح التسمية (بدون مجموعة مراقبة همي) التغييرات في الأعراض السريرية، كما صنفت من قبل الوالدين أو مقدمي الرعاية، وبعد العلاج مع HBOT. وأخيرا، فإن سلامة HBOT، وتستخدم في 1.3 و 1.5 أجهزة الصراف الآلي، تم تقييمها في الأطفال الذين يعانون من التوحد.
طرق

المرضى

ثمانية عشر أطفال، 4 فتيات و 14 الفتيان، الذين تتراوح أعمارهم تتراوح 3-16 سنوات، تم تقييم المشاركة والتحق في الدراسة. تم تعيين ستة أطفال غير عشوائيا إلى 1.5 ضغط جوي و 100٪ من الأكسجين، وكان 12 طفلا المتبقية بشكل عشوائي غير المسندة إلى 1.3 أجهزة الصراف الآلي و 24٪ أكسجين. حدث هذا التقسيم غير العادل للأطفال بين المجموعات عينة بسبب القيود المفروضة على جدولة ولأن مركز واحد (EM) معاملة فقط مجموعة 1،3 أجهزة الصراف الآلي (6 أطفال) في حين أن مركز آخر (DR) يعامل كل من أجهزة الصراف الآلي 1.3 (6 أطفال) و1.5 أجهزة الصراف الآلي (6 أطفال) مجموعات. تم تشخيص جميع المشاركين يعانون من اضطراب التوحد من نفساني مستقلة، طبيب أعصاب، طبيب نفساني، أو طبيب الأطفال التنموي واستيفاء معايير DSM IV لاضطراب التوحد [2]. تم استبعاد غير محدد وإلا (PDD-NOS) أو مرض أسبرجر من هذه الدراسة - الأطفال الذين يعانون من تشخيص اضطراب النمو المتفشي. استبعدت أيضا الأطفال الذين لديهم تاريخ من اضطرابات الاستيلاء. تم الحصول على الموافقة المسبقة خطية من الوالدين وكذلك، عندما يكون ذلك ممكنا، والطفل. تمت الموافقة على الدراسة والبروتوكول من قبل ليبرتي مجلس المراجعة المؤسسية. خط الأساس الطفولة التوحد تصنيف مقياس تم الحصول عليها (CARS) نقاط لتحديد شدة مرض التوحد. وكانت درجات التوحد مماثلة في كل من المجموعتين (انظر الجدول 1). خلال فترة الدراسة، كان الأطفال لا يسمح لهم الشروع في أي علاجات جديدة أو إيقاف أية العلاجات الحالية، بما في ذلك الأدوية والمكملات الغذائية. تم تجنيد الأطفال في هذه الدراسة من اثنين الممارسات (DR وEM) التي يتم فيها استخدام مضادات الأكسدة وعلاج لرفع مستويات الجلوتاثيون هي العلاجات شيوعا. لهذا السبب، فإن العديد من الأطفال كانوا يأخذون بالفعل المكملات الغذائية قبل بدء الدراسة، مثل حمض الفولينيك أو methylcobalamin (انظر الجدول 1). يسجل لم يتم العثور على فروق ذات دلالة إحصائية في استخدام المكملات، أو العمر، أو CARS الأولية بين الأطفال في الفئة 1.5 ضغط جوي بالمقارنة مع مجموعة 1،3 أجهزة الصراف الآلي.
الجدول 1. خصائص المشاركين خط الأساس وملامح ملحق
بروتوكول علاج الضغط العالي في 1.3 ضغط جوي و 24٪ أكسجين

اثنا عشر طفلا (11 الفتيان و1 فتاة، يعني سن 6.2 ± 4.0 سنوات، مجموعة 3-16 سنوات) تم تعيينه لتلقي العلاج على حدة الضغط العالي في حوالي 1.3 أجهزة الصراف الآلي و 24٪ أكسجين في غرفة الضغط العالي monoplace. دخل كل طفل في غرفة مع أحد الوالدين أو مقدمي الرعاية الأخرى. كان ضغط الوقت للحصول على ضغط 1.3 ضغط جوي ما يقرب من 10 دقيقة. خلال هذا الوقت المتوازنة للأطفال آذانهم المتوسطة عن طريق ابتلاع السائل، وتناول الطعام، أو التثاؤب. كان الأكسجين عند 10 لترا في الدقيقة الواحدة من الأوكسجين مختلطة مع هواء الغرفة وضخها في الغرفة. ونتج عن ذلك تركيز الأكسجين غرفة النهائي من ما يقرب من 24٪ مقاسا شاشة الأكسجين. تم رصد الطفل أثناء دورة العلاج كاملة. بعد 45 دقيقة من 24٪ من الأكسجين عند 1.3 أجهزة الصراف الآلي، ومخفف الغرفة على ما يقرب من 10 دقيقة. أعطيت هذا العلاج 45 دقيقة يوميا لمدة متوسطها 4.6 مرة في الأسبوع على مدى متوسط ​​فترة 9،0 الأسبوع، أي ما مجموعه 40 العلاجات لكل طفل.
بروتوكول علاج الضغط العالي في 1.5 ضغط جوي والأكسجين 100٪

تم تعيين ستة أطفال (3 أولاد و 3 بنات، متوسط ​​أعمارهم 7.7 ± 4.5 سنوات، مجموعة 3-16 سنوات) لتلقي العلاج على حدة الضغط العالي في 1.5 ضغط جوي و 100٪ الأكسجين في غرفة الضغط العالي monoplace. دخل كل طفل في غرفة مع أحد الوالدين أو مقدمي الرعاية الأخرى. كان ضغط الوقت للحصول على ضغط 1.5 ضغط جوي ما يقرب من 15 دقيقة. خلال هذا الوقت، المتوازنة للأطفال آذانهم المتوسطة عن طريق ابتلاع السائل، وتناول الطعام، أو التثاؤب. تم تركيب كل طفل مع طوق المطاط الرقبة وغطاء من البلاستيك واضحة من خلالها تم تسليم 100٪ من الأكسجين. تم تطبيق طوق المطاط الرقبة قبل الدخول في غرفة وكان يعلق على غطاء محرك السيارة من البلاستيك بعد أن حصل على ضغط 1.5 ضغط جوي. اثنين من الخراطيم، واحدة لإدخال الأوكسجين واحد للخروج الأوكسجين، وبعد ذلك تعلق على غطاء محرك السيارة. ثم تحول الأكسجين على ودخل غطاء محرك السيارة من خلال خرطوم واحد وخرجت من خلال خرطوم الثاني وإعادتها إلى خارج القاعة. كان مضغوطا الغرفة مع هواء الغرفة وبقي تركيز الأكسجين من الغرفة أقل من 23٪ خلال فترة العلاج. تم رصد الطفل أثناء دورة العلاج كاملة. بعد 45 دقيقة من الأكسجين 100٪ في 1.5 أجهزة الصراف الآلي، تم تحويل الأوكسجين خارج، وإزالة غطاء محرك السيارة، وكان مخفف الغرفة على ما يقرب من 10 دقيقة. أعطيت هذا العلاج 45 دقيقة يوميا لمدة متوسطها 4.7 مرات في الأسبوع على مدى متوسط ​​فترة 8،8 الأسبوع، أي ما مجموعه 40 العلاجات لكل طفل.
الدم للبروتين سي التفاعلي وعلامات الإجهاد التأكسدي

على الفور قبل أول علاج الضغط العالي وخلال 24 ساعة من الانتهاء من 40 عشر (مشاركة) علاج الضغط العالي، والصوم عينات الدم لقياس البروتين سي التفاعلي (CRP) وملامح الإجهاد التأكسدي تم استخلاصها. تم الحصول على ملامح الإجهاد التأكسدي وتحليلها بواسطة SJJ وSM بطريقة أعمى وفقا للإجراءات التي سبق وصفها [50، 51]. وقد أرسلت ورقات غرف الاجتماع لإطلاقها للتحليل. وقد أعمى الفنيين في إطلاقها إلى حقيقة أن أي من العينات المقدمة كانت للاستخدام في هذه الدراسة، وكانت تستخدم في أجهزة المختبر نفسه وتقنيات لقياس قبل وبعد عينات CRP.
مقاييس النتائج السريرية

حسبت عشرات المعالجة المسبقة وعشرات بعد العلاج لكل طفل باستخدام المرجعية السلوك الشاذ - المجتمع (ABC-C)، الاستجابة الاجتماعية مقياس (SRS)، والتوحد علاج التقييم المرجعية (ATEC). لتحديد النتائج، شغل والد أو وصي الآخر من كل مقياس قبل العلاج، وبعد 10، 20، 30، و 40 جلسات الضغط العالي.
في ABC-C هو الاستبيان 58-العنصر الذي يقيم التواصل والتفاعل الاجتماعي المتبادل، واللعب، والسلوكيات النمطية [74]. يتم استخدامه لتقييم آثار الأدوية والتدخلات العلاجية الأخرى، ويتم احتسابه من 0 ("ليس في كل مشكلة") 3 ("مشكلة حادة في درجة"). وعلى نطاق واسع وبنجاح استخدام ABC-C في التجارب السريرية للأفراد الذين يعانون من التوحد [75، 76]. لهذه الدراسة، بالإضافة إلى العشرات في 5 مجموعات فرعية (والتهيج، والانسحاب الاجتماعي (الخمول تسمى أيضا)، الرتابة، وفرط النشاط، والكلام غير اللائق)، وقد حسبت أيضا النتيجة الإجمالية.
وSRS هو اختبار التحقق من صحة مؤخرا من السلوك بين الأشخاص، والاتصالات، والصفات النمطية في التوحد [77]. وهو يتألف من خمسة مستويات فرعية: الوعي الاجتماعي، والإدراك الاجتماعي، التواصل الاجتماعي، والدافع الاجتماعي، والسلوكيات التوحد. وSRS يقيس درجة من العاهات الاجتماعية في الأطفال المصابين بالتوحد وغير مناسبة لتقييم نتائج العلاج. في هذه الدراسة، تم الحصول على مجموع نقاط الخام وحسبت درجات الخام لكل الفروع الجانبية.
وATEC هو الاستبيان الذي تم تطويره من قبل معهد أبحاث التوحد لتقييم فعالية العلاج عند الأشخاص الذين يعانون من التوحد. وهو يتألف من أربعة مستويات فرعية المسمى: الكلام / اللغة / الاتصالات، المؤانسة والتوعية الحسية / المعرفي، والصحة / الفيزيائي / السلوك. يتم ترجيح الدرجات وفقا لاستجابة والفروع الجانبية المقابلة. وارتفاع الفروع الجانبية ومجموع الدرجات، وأكثر من ضعف هذا الموضوع. وأشار التحليل انقسام نصف موثوقية على 1358 قوائم الاتساق الداخلي عالية بين الأسئلة في كل الفروع الجانبية [78]. يستخدم ATEC في بعض الدراسات كتدبير النتيجة [79، 80]. وهي مصممة للسماح الآباء والأطباء لتقييم نتائج بعض العلاجات التي تستخدم عادة في الأفراد الذين يعانون من التوحد. في هذه الدراسة، تم احتساب درجات الدرجة الكلية والفروع الجانبية المنفصلة الأربعة.
تقييم السلامة

في ترتيب تنازلي، والآثار الجانبية الأكثر شيوعا وجدت خلال HBOT هي الضغطي (معدل 2٪)، الجيوب الأنفية الضغط، التهاب الأذن الوسطى المصلي، الخوف من الأماكن المغلقة، قصر النظر عكسها، والاستيلاء بداية جديدة (والذي يحدث في 1-3 لكل 10،000 العلاجات) [12]. قبل البدء في الدراسة، خضع كل طفل الفحص البدني من قبل أي DR أو EM. تضمين هذا الفحص الدقيق للآذان والأغشية الطبلي. خلال كل معاملة، أحد الوالدين أو مقدمي الرعاية دخلت الغرفة مع كل طفل. طوال فترة العلاج، تم رصدها الأطفال عن كثب من قبل المشغل غرفة لأي علامات الألم الأذن، وصدرت تعليمات الآباء والأمهات على كيفية التعرف على آلام الأذن لدى أطفالهم. طفل واحد في المجموعة 1.5 ضغط جوي لا يمكن أن يتسامح مع ضغط معين خلال الدورة HBOT الأولى، وكان العلاج أن تتوقف بعد عدة دقائق فقط (كان الضغط التي تم الحصول عليها في هذه الدورة حوالي 1.1 ضغط جوي). لم فحص آذان الطفل لم تثبت أي الضغطي. ومع ذلك، قد انخفض أنابيب typanostomy الطفل مؤخرا. تم استبدال هذه قبل مواصلة المحاكمة، وكان الطفل قادرا على إنهاء 40 العلاجات دون وقوع حوادث أخرى. لم يتم العثور على الأحداث السلبية الأخرى خلال هذه الدراسة، بما في ذلك الضغطي أو التشنجات. أنهى جميع الأطفال 40 علاجات الضغط العالي.
تحليل البيانات

وتعرض البيانات كما يعني ± الانحرافات المعيارية. والبيانات التي جمعت بأثر رجعي وتحليلها باستخدام برنامج SigmaStat. تم التأكد فروق ذات دلالة إحصائية في التغيرات في كل مقياس (ABC-C، SRS، وATEC) والتغيرات في CRP والاكسدة علامات بين خط الأساس مقابل نهاية 40 علاجات الضغط العالي باستخدام ر اختبار الطالب مع أهمية وضعت في 0.05.
النتائج

لمحات الاكسدة

الشكل 1 (أ-د) يسرد النتائج الشخصي الاكسدة. العمود الأول في كل رسم بياني هو القيمة المتوسطة للأطفال السيطرة كما وصفها جيمس وآخرون. [51] ويتم تضمين كمرجع القياسية (وصفت بانها "السيطرة"). يعني البلازما الجلوتاثيون المؤكسد (GSSG) لم تتغير بشكل ملحوظ في أي مجموعة 1،3 أجهزة الصراف الآلي (ع = 0.557) أو مجموعة 1.5 أجهزة الصراف الآلي (ع = 0.583). مجموع الجلوتاثيون البلازما (tGSH) إلى نسبة GSSG (tGSH / GSSG) (ص = 0.146 في 1.3 ضغط جوي؛ P = 0.072 في 1.5 ضغط جوي) والجلوتاثيون مجانا (fGSH) إلى نسبة GSSG (fGSH / GSSG) (ص = 0.040 عند 1.3 أجهزة الصراف الآلي ؛ P = 0.076 في 1.5 ضغط جوي) انخفض كلا بعد HBOT في أجهزة الصراف الآلي 1.3 و 1.5 ضغط جوي. يعني الأدينوزين ارتفاعا طفيفا بنحو 1.3 أجهزة الصراف الآلي (ع = 0.588)، وانخفض بنسبة 1.5 أجهزة الصراف الآلي (ع = 0.078).
الشكل 1. التغيرات في متوسط ​​القيم الدم قبل وبعد العلاج الضغط العالي في كل من أجهزة الصراف الآلي 1.3 و 1.5 ضغط جوي. العمود الأول في الاعلان هو القيمة المتوسطة للأطفال السيطرة كما وصفها جيمس وآخرون. [51] ويتم تضمين كمرجع القياسية (وصفت بانها "السيطرة"). يتم سرد P-القيم ومستويات الدم فوق شريط الرسوم البيانية و: التغييرات في متوسط ​​مستويات الجلوتاثيون المؤكسد ب: التغييرات في متوسط ​​tGSH / GSSG ج: التغييرات في متوسط ​​fGSH / GSSG د: التغييرات في مستويات الأدينوساين متوسط
لمحات CRP

الشكل 2 تظهر التغييرات في متوسط ​​CRP في كلا المجموعتين. في المجموعة 1.3 أجهزة الصراف الآلي، يعني تراجع مستوى CRP بواسطة 89.5٪ من 6.1 ± 10.3 ملغم / لتر إلى 0.64 ± 0.87 ملغ / لتر (P = 0.123). من المذكرة، وكان 3 أطفال وسيلة بدءا قيمة CRP من 21.8 ± 9.2 ملغ / لتر ("عالية مجموعة CRP")، والتي انخفضت إلى 0.2 ملغم / لتر في كل طفل (ع = 0.052) بعد العلاج الضغط العالي. أظهر تحليل ل9 أطفال المتبقية ("منخفض مجموعة CRP") عدم حدوث تغير كبير في القيم CRP متوسط ​​(0.88 ملغم / لتر إلى 0.79 ملغم / لتر، ص = 0.854). في المجموعة 1.5 أجهزة الصراف الآلي، يعني رفض CRP بواسطة 61.4٪ من 0.7 ± 0.5 ملغ / لتر إلى 0.27 ± 0.19 ملغ / لتر (P = 0.084). أظهرت دراسة CRP في جميع الأطفال 18 في الدراسة أن CRP بنسبة 88.4٪ من متوسط ​​قيمة بدءا من 4.3 ± 8.7 ملغ / لتر إلى 0.5 ± 0.7 ملغ / لتر (P = 0.021).
الشكل 2. التغيرات في متوسط ​​CRP قبل وبعد العلاج الضغط العالي في كل من أجهزة الصراف الآلي 1.3 و 1.5 ضغط جوي. وترد P-القيم ومستويات الدم فوق شريط الرسوم البيانية.
النتائج السريرية

1.3 تحليل مجموعة أجهزة الصراف الآلي

جدول 2 يظهر التحسن في SRS (ع = 0.046) وATEC (ع = 0.007) ل12 طفلا في الفئة 1.3 أجهزة الصراف الآلي. تقييم ABC-C، SRS، والفروع الجانبية ATEC (الشكل 3A-ج) يوضح تحسينات كبيرة في SRS الاتصالات (ع = 0.035). SRS الدافع (ع = 0.021). السلوكيات SRS (ع = 0.011). خطاب ATEC / اللغة / الاتصالات (ع = 0.033). ATEC الوعي الحسي / المعرفي (ع = 0.026). وATEC الصحة / المادي / السلوك (ع = 0.012).
الجدول 2. متوسط ​​درجات الإجمالية لل12 طفلا في 1.3 ضغط جوي، 24٪ أكسجين

الشكل 3. التغيرات في موازين السريرية في أجهزة الصراف الآلي 1.3 و 24٪ أكسجين. انخفاض درجات على مقياس تشير كل التحسينات السريرية. يتم سرد عشرات فوق شريط الرسوم البيانية في الأساس (0) وبعد كل 10 العلاجات (10، 20،30، و 40). وترد P-القيم فوق شريط الرسوم البيانية و: التغييرات في مستويات فرعية ABC-C عند 1.3 أجهزة الصراف الآلي و 24٪ أكسجين ب: التغييرات في SRS الفروع الجانبية عند 1.3 أجهزة الصراف الآلي و 24٪ أكسجين ج: التغييرات في ATEC الفروع الجانبية عند 1.3 أجهزة الصراف الآلي و 24٪ من الأكسجين.
1.5 تحليل مجموعة أجهزة الصراف الآلي

جدول 3 يظهر التحسن في SRS (ع = 0.035) وATEC (ع = 0.020) ل6 أطفال في المجموعة 1.5 أجهزة الصراف الآلي. فحص مستويات فرعية (الشكل 4A-ج) يوضح تحسينات كبيرة في ABC-C الانسحاب الاجتماعي (ع = 0.008). SRS الدافع (ع = 0.018). خطاب ATEC / اللغة / الاتصالات (ع = 0.040). وATEC الوعي الحسي / المعرفي (ع = 0.013).
الجدول 3. متوسطات درجات الإجمالية لل6 أطفال في 1.5 ضغط جوي، و 100٪ من الأكسجين

الرقم 4. التغيرات في موازين السريرية في أجهزة الصراف الآلي 1.5 و 100٪ من الأكسجين. انخفاض درجات على مقياس تشير كل التحسينات السريرية. Scoresare المذكورة أعلاه في شريط الرسوم البيانية في الأساس (0) وبعد كل 10 العلاجات (10، 20، 30، و 40). وترد P-القيم فوق شريط الرسوم البيانية و: التغييرات في مستويات فرعية ABC-C في 1.5 ضغط جوي و 100٪ الأكسجين ب: التغييرات في SRS الفروع الجانبية في 1.5 ضغط جوي و 100٪ الأكسجين ج: التغييرات في ATEC الفروع الجانبية في 1.5 ضغط جوي و 100٪ الأكسجين.
نقاش

على حد علمنا، وتمثل هذه الدراسة أول دراسة استطلاعية على استخدام HBOT للأطفال المصابين بالتوحد. في هذه الدراسة، تم استخدام ضغوط أقل الضغط العالي من تلك المستخدمة تقليديا (عادة ضغوط من أجهزة الصراف الآلي 2.0 وما فوق [13]) لعلاج معظم المؤشرات السريرية. ومع ذلك، تم الحصول على زيادات كبيرة في إيصال الأوكسجين خلال هذه الدراسة. تركيز الأكسجين في هواء الغرفة عند مستوى سطح البحر (1 الصراف الآلي) حوالي 160 مم زئبق. وتقع مواقع الدراسة اثنين على ما يقرب من 500 و 900 قدم فوق مستوى سطح البحر (0،97-0،98 أجهزة الصراف الآلي). ولذلك، كان تسليم الأوكسجين في المجموعة 1.3 ضغط جوي حوالي 232 مم زئبق وهو ما يقرب من 45٪ أكثر من الشروط هواء الغرفة. في المجموعة 1.5 أجهزة الصراف الآلي، وإيصال الأوكسجين 1142 ملم زئبقي أو أكثر من 7 مرات أكثر من الشروط هواء الغرفة. كمية الأوكسجين تسليمها في المجموعة 1.3 ضغط جوي مماثل لالكمية المستخدمة في دراسة سابقة على HBOT في الأطفال الذين يعانون CP التي تستخدم 1.3 أجهزة الصراف الآلي وضغط هواء الغرفة ("الهواء الضغط العالي") [26]. في هذه الدراسة، وعلق الباحثون أن كمية الأوكسجين ألقاها في 1.3 ضغط جوي كان يمكن تحقيقه باستخدام "28٪ من الأكسجين مع قناع، من دون ضغوط". ومع ذلك، فإن هذا الرأي لا تمثل الآثار السريرية المحتملة لزيادة الضغط الجوي تسليم، لأن حتى كميات منخفضة من زيادة الضغط قد تؤدي إلى تغيرات سريرية كبيرة [44، 81]. وعلاوة على ذلك، جادل المؤلفون أن الهواء الضغط العالي في 1.3 ضغط جوي من غير المرجح أن تقدم فائدة سريرية (ق) لأنه يعتقد أن آلية عمل HBOT في CP أن ذلك يعود إلى "ظاهرة شبه الظل" والتي لها تأثير سريري بسبب "محض تأثير الضغط "لم" لا تتوافق مع المنطق وراء هذا العلاج بالأكسجين تحت الضغط " [26]. منذ آلية عمل HBOT في التوحد قد تكون مختلفة مما كانت عليه في CP [11]، بما في ذلك تقليل الالتهاب (كما استعرض في قسم خلفية هذه الورقة)، فمن الممكن تماما أن قد تنشأ فوائد سريرية من زيادة محض ضغط الغلاف الجوي تسليم، بسبب زيادة تسليم الضغط بدون أوكسجين إضافي يبدو أن انخفاض التهاب (مقاسا عن طريق تثبيط إطلاق انترفيرون جاما)، وإيصال الأوكسجين بواسطة قناع دون أي زيادة في الضغط قد تزيد في الواقع من التهاب (مقاسا زيادة في الافراج انترفيرون غاما) [44]. منذ HBOT تتكون من 2 المتغيرات المستقلة (الضغط وتركيز الأكسجين من وحي)، هناك حاجة لدراسات المقارنة في الأفراد المصابين بالتوحد قبل تحديد أن الآثار السريرية 1.3 أجهزة الصراف الآلي و 24٪ أكسجين مماثلة لتلك التي تم الحصول عليها عن طريق تقديم الأوكسجين من قبل قناع وحدها دون ضغوط إضافية . بالإضافة إلى ذلك، هناك حاجة لمزيد من الدراسات التي تقيم ليس فقط الآثار السريرية لفرط التأكسج ألقاها HBOT، ولكن أيضا من آثار زيادة الضغط الجوي، لأن كل هذه الآثار قد تؤدي إلى نتائج سريرية مختلفة اعتمادا على الفيزيولوجيا المرضية المرض الأساسي.
وكان الهدف الرئيسي من هذه الدراسة هو تحديد الآثار المترتبة على HBOT على علامات الإجهاد التأكسدي لدى الأطفال المصابين بالتوحد. وكانت أهداف أخرى لقياس آثار HBOT على CRP والتغييرات في الأعراض السريرية. كان القصد النهائية لفحص سلامة HBOT للاستخدام في الأطفال الذين يعانون من التوحد. من المذكرة، واستخدمت مرات علاج الضغط العالي أقصر مدة (45 دقيقة) مما هو التقليدية (60 دقيقة). ويعزى ذلك، في جزء منه، إلى القيود الجدولة.
تقييم آثار HBOT على علامات الاكسدة

مؤخرا، جيمس وآخرون. أظهرت أن الأطفال المصابين بالتوحد لديهم معدلات أقل من البلازما خفضت (النشطة) GSH وزادت مستويات المؤكسد (غير نشط) GSH عند مقارنة للسيطرة على الأطفال [51]. وكانت نسبة tGSH / GSSG متوسط ​​في 73 طفلا السيطرة 28.2 ± 7.0 و 80 في الأطفال المصابين بالتوحد كانت 14.7 ± 6.2 (P <0.0001). وكانت نسبة fGSH / GSSG متوسط ​​7.9 ± 3.5 في الأطفال التحكم و 4.9 ± 2.2 في الأطفال المصابين بالتوحد (P <0.0001). وكان متوسط ​​GSSG في الأطفال السيطرة 0.24 ± 0.1 ميكرومول / L و 0.40 ± 0.2 ميكرومول / لتر في الأطفال المصابين بالتوحد (P <0.0001) [51]. في دراسة سابقة أظهرت نفس هؤلاء الباحثون أن إضافة 800 ميكروغرام حامض الفولينيك، 1000 ملغ من البيتين، و 75 ميكروغرام / كغ من methylcobalamin حقن رفعت tGSH / GSSG في 8 أطفال المصابين بالتوحد من 7،5 ± 2،3 حتي 28،7 ± 7.1 (ع = 0.002) وخفضت GSSG من 0.59 ± 0.2 نانومول / لتر إلى 0.25 ± 0.05 نانومول / لتر (P = 0.008). وكان هؤلاء الأطفال 8 بعض التحسينات في الكلام والإدراك، وبعد هذه العلاجات، وكانت مستويات tGSH / GSSG وGSSG على حد سواء بالقرب من المستويات التي وجدت في الأطفال المراقبة [50].
في الدراسة الحالية، كان متوسط ​​الأولي tGSH / GSSG 28.47 ± 4.59 في مجموعة 1،3 أجهزة الصراف الآلي و± 44.68 14.19 في مجموعة 1،5 أجهزة الصراف الآلي (انظر الشكل 1B). هذه القيم هي قريبة أو أعلى من القيم الموجودة في الأطفال التحكم كما هو موضح أعلاه وأعلى من القيم وصفها في بعض الأطفال الذين يعانون من التوحد [50، 51]. قد يكون راجعا إلى العلاجات تنفيذها لرفع مستويات الجلوتاثيون، بما في ذلك حمض الفولينيك وmethylcobalamin، فيها العديد من الأطفال كانوا يتناولون قبل البدء في دراسة هذه القيم زيادة. النظر في مجموعة 1.3 ضغط جوي يوضح أن 7 من أصل 12 طفلا كانوا يأخذون حمض الفولينيك، methylcobalamin، أو كليهما. في المجموعة 1.5 أجهزة الصراف الآلي، 5 من 6 أطفال كانوا يتناولون حمض الفولينيك، methylcobalamin، أو كليهما. ومن المثير للاهتمام، أظهر تحليل التغيرات في علامات CRP والاكسدة في الأطفال الذين يتناولون هذه المكملات 2 بالمقارنة مع الأطفال عدم اتخاذ هذه الملاحق 2 لا فرق ذو دلالة إحصائية في التغيرات في CRP، GSSG، tGSH / GSSG، وfGSH / GSSG (بيانات لا يظهر) في كل من أجهزة الصراف الآلي 1.3 و 1.5 ضغط جوي.بالإضافة إلى ذلك، أظهر تحليل التغيرات النتيجة على ABC-C، SRS، وATEC أي فروق ذات دلالة إحصائية في الأطفال الذين يتناولون أي أو كل من هذه الملاحق 2 بالمقارنة مع الأطفال الذين لا يتناولون هذه (لا تظهر البيانات). وبعبارة أخرى، الأطفال الذين يتناولون بالفعل حمض الفولينيك، methylcobalamin، أو كان كل من تغييرات مماثلة في علامات الاكسدة، CRP، والنتائج السريرية من الأطفال لا يتناولون هذه المكملات.
في كل الفئات أجهزة الصراف الآلي 1.3 و 1.5 أجهزة الصراف الآلي، بعد العلاج الضغط العالي، وكانت نسب tGSH / GSSG وfGSH / GSSG على حد سواء قريبة من القيم التي وصفها جيمس وآخرون. في الأطفال التحكم (انظر الشكل 1B و 1C) وكانت لا تزال أعلى من النسب الموجودة في معظم الأطفال الذين يعانون من التوحد[51]. الأهم من ذلك، من وجهة نظر الاكسدة ومستويات GSSG في كل الفئات أجهزة الصراف الآلي 1.3 و 1.5 ضغط جوي لم تتغير بشكل ملحوظ مع العلاج، وكانت قريبة جدا من مستويات GSSG وجدت في الأطفال التحكم (انظر الشكل 1A). البلازما GSSG هو علامة موثوقة من الاكسدة داخل الخلايا لأنه يتم تصدير فقط من الخلايا عندما تتجاوز مستويات الخلايا القدرة الأكسدة. وعلاوة على ذلك، مستويات البلازما GSSG تعد مؤشرا أفضل من الاكسدة داخل الخلايا من tGSH وfGSH [82].ولذلك، لم HBOT في الضغوط المستخدمة في هذه الدراسة لا تسوء بشكل ملحوظ الاكسدة داخل الخلايا التي تقاس التغيرات في GSSG البلازما. بالإضافة إلى ذلك، كان هناك اتجاه لخفض مستويات الأدينوزين في المجموعة 1.5 أجهزة الصراف الآلي (ع = 0.078). وقد وصفت الأدينوزين ارتفاع في مجموعة فرعية من الأطفال الذين يعانون من التوحد وعادة ما يؤدي إلى ارتفاع S-adenosylhomocysteine ​​(SAH). هذا فيما يتعلق بسبب SAH يمنع معظم ميثيل الخلوي[51]. لذلك، خفض مستويات الأدينوزين يمكن أن تكون ذات أهمية سريرية في مجموعة فرعية من الأطفال المصابين بالتوحد لديهم مستويات الأدينوساين مرتفعة.
بالرغم من أن الأطفال في هذه الدراسة زيارتها تغييرات مماثلة في علامات الإجهاد التأكسدي، CRP، والنتائج السريرية أم لا أنهم يأخذون حمض الفولينيك و / أو methylcobalamin، العلاجات لرفع مستويات الجلوتاثيون في الأطفال المصابين بالتوحد [50] قبل البدء HBOT في الضغط المستخدمة في هذه الدراسة تظهر الحكمة. وعلاوة على ذلك، فإن استخدام المواد المضادة للاكسدة[83] قد تكون مفيدة في المرضى الذين يعانون من ظروف زيادة الاكسدة قبل HBOT يتم التفكير، وخاصة منذ المكملات المضادة للأكسدة ومن المسلم به عموما أنه آمن. ومن المعروف أن العديد من المكملات الغذائية المضادة للأكسدة لتخفيف التوتر التأكسدي الناتج عن ارتفاع ضغط HBOT (فوق 2.5 ضغط جوي) بما في ذلك حمض α-يبويك[48]، الميلاتونين[84]، N أسيتيل[85، 86]، وفيتامين E[87] والريبوفلافين[88] والسيلينيوم[87، 88]، والجلوتاثيون[89]. وعلاوة على ذلك، في دراستين مزدوجة التعمية، وتحسين العلاج مع مضاد للأكسدة، بالمقارنة مع الدواء الوهمي، والسلوك في بعض الأطفال المصابين بالتوحد[90، 91].
تقييم آثار HBOT على بروتين سي التفاعلي

لأن بعض الأطفال المصابين بالتوحد لديهم أدلة على neuroinflammation [+36 - 38] والتهاب المعدة والأمعاء[39، 40]، وأنه من المعروف HBOT لامتلاك خصائص مضادة للالتهابات[43، 92] ويمكن أن تقلل كلا neuroinflammation[42] والتهاب المعدة والأمعاء[46، 47]، وتم قياس كمية التغييرات في علامة على حدوث الالتهابات خلال هذه الدراسة. وقد تم اختيار CRP (انظر الشكل 2) لأنه عادة مرتفعة مع التهاب[93] ومتاحة بسهولة. في 3 أطفال من مجموعة 1،3 أجهزة الصراف الآلي مع CRP الأولي عالية جدا، تم العثور على تحسينات كبيرة في متوسط ​​CRP بعد العلاج (ع = 0.052). كان 9 أطفال المتبقية في المجموعة 1.3 ضغط جوي تحسن طفيف ولكن غير كبير من 0،09 ملغ / لتر. ومع ذلك، كان CRP متوسط ​​الأولي في هؤلاء الأطفال 9 0.88 ملغم / لتر والتي تركت مجالا كبيرا للتحسين. أظهرت مجموعة 1،5 أجهزة الصراف الآلي تحسنا في متوسط ​​CRP 0.43 ملغ / لتر (P = 0.084). ومع ذلك، منذ أن بدأ الأطفال في الفئة 1.5 أجهزة الصراف الآلي مع انخفاض مستويات بروتين سي التفاعلي الأولية، كانت تحسينات كبيرة في CRP في هؤلاء الأطفال غير ممكن. فقط هؤلاء الأطفال مع CRP عالية الأولي يمكن أن يتعرض تحسينات كبيرة، وهو ما تبين في هذه الدراسة. تجميع البيانات لإجراء تغييرات في القيم CRP من جميع الأطفال 18 في هذه الدراسة أظهرت تحسنا كبيرا بعد العلاج الضغط العالي (P = 0.021). مزيد من التقييم من آثار العلاج الضغط الزائد على الالتهاب وعلامات للالتهابات في الأطفال المصابين بالتوحد، وخصوصا في ضغوط وتركيز الأكسجين متفاوتة، له ما يبرره.
تقييم آثار HBOT على النتائج السريرية

وكانت آخر حصيلة هذه الدراسة إلى دراسة بأثر رجعي إذا أدى استخدام العلاج الضغط العالي في تحسين الأعراض السريرية. من تجربتنا السريرية باستخدام HBOT في الأطفال المصابين بالتوحد، وبعض الآباء قد لاحظوا تحسنا في أطفالهم. في هذه الدراسة، تم إنشاء جرد من الأعراض السريرية تتأثر HBOT للمساعدة في تحديد ما إذا كان مبررا محاكمة تسيطر عليها بشكل اكبر، والتحقيق الذي أدوات التقييم قد يكون من الأفضل أن تستخدم في تصميم دراسة أكبر.
لم قياسات هذه النتائج السريرية لديهم بعض القيود والضعف الكامنة. استخدام جداول تصنيف الأصل والواقع أن الآباء لم تكن أعمى لنوع من العلاج نظرا لطفلهما قد أدخلت بعض التحيز. وعلاوة على ذلك، لم يكن هناك مجموعة العقار الوهمي أو السيطرة عليها. لذلك، يمكن أن التحسينات الموجودة في هذه الدراسة المفتوح التسمية يكون راجعا لمجرد الصدفة أو إلى التطور الطبيعي للأطفال. وبالإضافة إلى ذلك، فمن الممكن أن أي تحسينات السريرية لوحظ أن وقعت نتيجة لزيادة التفاعل الوثيق بين الطفل والوالدين / مقدمي الرعاية، أو الدافع و / أو الحماس الذي قد وضعت في الأصل / الرعاية أثناء ل العلاجات. لأن هذا كان دراسة تجريبية، وكانت أحجام عينة صغيرة مما يجعل من الصعب إجراء مقارنات كافية وذات مغزى بين 2 الضغوط المختلفة وتركيزات الأكسجين المستخدمة. ونظرا لهذه القضايا، وهي أكبر مزدوجة التعمية، دراسة استطلاعية يتضمن مجموعة المراقبة والتدابير نتائج أكثر موضوعية له ما يبرره.
ومع ذلك، ونظرا لهذه القيود، تم العثور على تحسينات كبيرة في بعض المناطق في كل من أجهزة الصراف الآلي 1.3 ومجموعة أجهزة الصراف الآلي 1.5. وقد شوهدت هذه التحسينات في مجالات متنوعة بما في ذلك والتهيج، والانسحاب الاجتماعي، وفرط النشاط، والتحفيز، والكلام، والحسي / الوعي المعرفي (أنظر الشكلين 3 و 4). كان هذا مجموعة من التحسينات غير متوقع إلى حد ما، ولكن يمكن تفسير حقيقة أن العديد من الأطفال المصابين بالتوحد لديهم نقص انسياب الدم في الدماغ والتي غالبا ما تختلف في الموقع من طفل إلى طفل [35] ويرتبط تشريحيا[11] مع العديد من أعراض التوحد الأساسية بما في ذلك السلوك في التنبيه الذاتي المتكرر[94]، وضعف في اللغة[95] والتفاعل الاجتماعي [34]. فمن الممكن أن HBOT قد تساعد في التغلب على آثار نقص انسياب الدم الدماغي من خلال توفير المزيد من الأوكسجين إلى الدماغ [21، 41]، وعن طريق التسبب في الأوعية الدموية على مر الزمن[24، 92]. كما ذكر سابقا، هيوسير وآخرون. أظهرت تحسنا في انسياب الدم الدماغي مقاسا مسح SPECT في الأطفال المصابين بالتوحد بعد العلاج الضغط الزائد عند 1.3 أجهزة الصراف الآلي [31].لأن HBOT قد تحسن مناطق متنوعة من نقص انسياب الدم الدماغي، ولأن هذه المناطق قد تختلف بالإضافة إلى ذلك في الموقع من طفل إلى آخر، والنتائج السريرية المختلفة يمكن أن يحدث. مزيد من البحوث في هذا المجال، وذلك باستخدام HBOT جنبا إلى جنب مع بالاشعة SPECT قبل وبعد الضغط العالي، قد يكون مفيدا في استكشاف هذه الفرضية أيضا. وهناك اتجاه نحو زيادة ضعف الكلام غير المناسب في المجموعة 1.3 أجهزة الصراف الآلي (انظر الشكل 3A) لوحظ. لم ينظر إلى هذه النتيجة في المجموعة 1.5 أجهزة الصراف الآلي (انظر الشكل 4A). هناك ما يبرر مزيدا من الدراسة على آثار HBOT عند 1.3 أجهزة الصراف الآلي على الكلام غير اللائق.
تقييم سلامة HBOT في الأطفال الذين يعانون من التوحد

يعتبر استخدام HBOT للأطفال بصفة عامة آمنة، حتى في الضغوط من 2.0 أجهزة الصراف الآلي لمدة 2 ساعة في اليوم [32].ومع ذلك، على حد علمنا، وسلامة HBOT للأطفال الذين يعانون من التوحد لم يتم تقييمها من قبل. لذلك، طوال كل دورة الضغط العالي، تمت متابعة الأطفال بشكل مكثف. بالإضافة إلى ذلك، أحد الوالدين أو مقدمي الرعاية رافق كل طفل في الغرفة، التي وفرت مراقبة إضافية. وخلال هذه الدراسة، لم يشاهد أحداث سلبية كبيرة وكانت العلاجات تحملها جيدا. هذه النتائج تشير إلى أن الضغوط الضغط العالي وتركيزات الأكسجين المستخدمة في هذه الدراسة هي آمنة عند الأطفال المصابين بالتوحد.
الخلاصة

هذه الدراسة التجريبية التسمية مفتوحة المحتملين في الأطفال الذين يعانون من التوحد تشير، إذا ما قيست التغيرات في GSSG البلازما، والتي HBOT تتراوح 1،3-1،5 أجهزة الصراف الآلي، و 24٪ إلى 100٪ من الأكسجين لا ترتبط بشكل كبير بزيادة الاكسدة داخل الخلايا. استخدام العلاجات لرفع مستويات الجلوتاثيون وانخفاض الاكسدة قبل البدء HBOT في الأفراد المصابين بالتوحد يبدو من الحكمة. بين الأطفال مع CRP الأولي عالية، أدى العلاج الضغط العالي إلى تحسن كبير في مستويات بروتين سي التفاعلي. هذا يشير إلى أن التهاب في هؤلاء الأطفال تحسنت مع العلاج. لوحظ تحسن في النتائج السريرية مقاسا عدة جداول في كل من أجهزة الصراف الآلي 1.3 و 1.5 ضغط جوي. ومع ذلك، لأن هذه الدراسة كانت التسمية مفتوحة، لا يمكن استخلاص استنتاجات حول فعالية HBOT كعلاج للأطفال الذين يعانون من التوحد في هذا الوقت. بيانات قاطعة بشأن فعالية HBOT لعلاج الأطفال الذين يعانون من التوحد يجب أن ننتظر النتائج من مزدوجة التعمية، والمحاكمات التي تسيطر عليها في المستقبل. وأخيرا، كانت تدار HBOT بأمان للأطفال المصابين بالتوحد في هذه الدراسة، وتمكنوا من إنهاء 40 جلسة HBOT دون أي أحداث سلبية كبيرة لجميع المشاركين.
قائمة الاختصارات المستخدمة

ABC-C - الشاذة سلوك المرجعية المجتمعية
ATEC - التوحد علاج التقييم المرجعية
أجهزة الصراف الآلي - جو
CARS - الطفولة التوحد مقياس تصنيف
CP - الشلل الدماغي
CRP - بروتين سي التفاعلي
fGSH - الجلوتاثيون مجاني
GSH - الجلوتاثيون
GSSG - مكسد الجلوتاثيون
HBOT - العلاج بالأوكسجين تحت الضغط
NS - لا يعتد به إحصائيا
PDD-NOS - اضطراب النمو المتفشي - غير محدد وإلا
SAH - S-adenosylhomocysteine
الهيئة العامة للسدود - الفائق
SPECT - انبعاث فوتون واحد التصوير المقطعي
SRS - الاستجابة الاجتماعية مقياس
tGSH - مجموع الجلوتاثيون

 

__________________
استشارى الادوية الطبيعيه وباحث وخبير فى علاجات التوحد
رد مع اقتباس
  #38  
قديم 12-07-2015, 05:23 PM
رافت ابراهيم رافت ابراهيم غير متواجد حالياً
عضو ذهبي
 
تاريخ التسجيل: Dec 2011
المشاركات: 520
افتراضي العلاج بالأكسجين تحت الضغط يقلل الالتهاب والحساسية الميكانيكية في نموذج حيواني من آلام التهاب

 

دوى: 10.1016 / j.brainres.2006.04.088
الحصول على الحقوق والمحتوى

ملخص

وقد استخدم العلاج بالأكسجين تحت الضغط لعلاج مجموعة متنوعة من الأمراض من التسمم بأول أكسيد الكربون إلى فيبروميالغيا. وكان الغرض من هذه التجربة لاستكشاف تأثير العلاج بالأكسجين تحت الضغط على الالتهاب الناجم عن الكاراجينان وألم في الفئران. العلاج بالأكسجين تحت الضغط انخفضت بشكل ملحوظ الالتهاب والألم بعد الحقن الكاراجينان. سريريا الأكسجين الضغط العالي يمكن أن تستخدم في الحالات التي يتم فيها بطلان NSAIDS أو في الحالات المستمرة للالتهاب.
الكلمات الدالة
http://www.sciencedirect.com/science...06899306012182

 

__________________
استشارى الادوية الطبيعيه وباحث وخبير فى علاجات التوحد
رد مع اقتباس
  #39  
قديم 12-07-2015, 05:26 PM
رافت ابراهيم رافت ابراهيم غير متواجد حالياً
عضو ذهبي
 
تاريخ التسجيل: Dec 2011
المشاركات: 520
افتراضي

 

الأكسجين الضغط العالي يحمي ضد الاكسدة حفز lipopolysaccharide في وفيات في الفئران
http://www.sciencedirect.com/science...1429990401413X



الجذور الحرة وسطاء proinflammatory قد تورطت في التسبب في صدمة الذيفان الداخلي، وهو مرض مع ارتفاع معدل الوفيات الناجمة عن الذيفان الداخلي الجرثومي سلبية الغرام. ويستخدم الأكسجين الضغط العالي باعتبارها العلاج المساعد لمختلف الأمراض الالتهابية ويظهر آثار مفيدة في متلازمة الصدمة الناجمة عن lipopolysaccharide في. ومع ذلك، لا يزال يتعين تعريف آليات الكامنة وراء هذه الآثار. في هذه الدراسة، ونحن التحقيق في تأثير بالأكسجين تحت الضغط على وسطاء التهابات، والجذور الحرة، وفيات في الفئران الذيفان الداخلي. تم حقن فئران ويستار كيوتو مع lipopolysaccharide في (10 ملغ / كلغ) ثم تتعرض لأمينوغوانيدين، المانع من أكسيد النيتريك محرض (NO) سينسيز (البلعة حقن 2 ساعة بعد lipopolysaccharide في)، أو الضغط العالي الأوكسجين (2 ATA لمدة 60 دقيقة 1، 4 و 9 و 24 ساعة بعد lipopolysaccharide في). البلازما عامل نخر الورم ألفا (TNF-α)، NO، تم الكشف عن والفائق شاردة وجرى تقييم الاستجابة ارتخاء وعائي ومعدل البقاء على قيد الحياة. وأظهرت النتائج أن الزيادة في البلازما TNF-α وNO، وvasohyporeactivity الناجم عن العلاج lipopolysaccharide في تم مستعمل بشكل كبير من الأكسجين الضغط العالي وأمينوغوانيدين. وفيات والفائق الأوعية الدموية أنيون إنتاج العلاج lipopolysaccharide في أيضا خفض بشكل ملحوظ عن طريق العلاج بالأكسجين تحت الضغط، ولكن لم يتم الحفاظ عليه من خلال أمينوغوانيدين. تم تغيير أي من المعلمات عن طريق العلاج بالأكسجين تحت الضغط وحده. وبالتالي، التعرض المتكرر الأكسجين الضغط العالي الموهن إلى حد كبير وسطاء التهابات، والجذور الحرة، وفيات في الفئران الذيفان الداخلي.

 

__________________
استشارى الادوية الطبيعيه وباحث وخبير فى علاجات التوحد
رد مع اقتباس
  #40  
قديم 12-07-2015, 05:32 PM
رافت ابراهيم رافت ابراهيم غير متواجد حالياً
عضو ذهبي
 
تاريخ التسجيل: Dec 2011
المشاركات: 520
افتراضي تدريب التكامل السمعي والعلاجات الصوت الأخرى لاضطرابات طيف التوحد: مراجعة منهجية

 

http://adc.bmj.com/content/91/12/1018.short



الأهداف: تحديد فعالية التدريب السمعي التكامل (AIT) أو غيرها من أساليب العلاج السليم في الناس الذين يعانون من اضطرابات طيف التوحد (ASD).

تصميم الدراسة: أجريت مراجعة منهجية من التجارب العشوائية (المضبوطة) من البالغين أو الأطفال الذين يعانون من التوحد. وقد حاول التحليل التلوي.

النتائج: ستة المضبوطة من AIT، بما في ذلك واحدة محاكمة كروس، وقد تم تحديد، مع ما مجموعه 171 من المشاركين الذين تتراوح أعمارهم بين 3-39 عاما. واستخدمت 17 مقاييس النتائج مختلفة، مع اثنين فقط من التدابير نتائج استخدامها من قبل ثلاثة أو أكثر من الدراسات. كان التحليل التلوي غير ممكن نظرا لعدم تجانس عالية جدا أو عرض البيانات في أشكال غير صالحة للاستعمال. لم تظهر ثلاث دراسات أية فائدة من AIT على الأوضاع السيطرة. ذكرت ثلاث دراسات تحسينات في 3 أشهر في المجموعة AIT لمجموع متوسطات درجات السلوك الشاذة المرجعية (ABC)، والتي هي من صلاحية مشكوك فيها. ومن بين هؤلاء، ذكرت إحدى الدراسات أيضا تحسينات في 3 أشهر في المجموعة AIT لABC عشرات فرعية. ولم يبلغ عن أي آثار سلبية كبيرة من AITالترجمة من Google

 

__________________
استشارى الادوية الطبيعيه وباحث وخبير فى علاجات التوحد
رد مع اقتباس
إضافة رد

أدوات الموضوع
طريقة عرض الموضوع

تعليمات المشاركة
لا تستطيع إضافة مواضيع جديدة
لا تستطيع الرد على المواضيع
لا تستطيع إرفاق ملفات
لا تستطيع تعديل مشاركاتك

BB code is متاحة
كود [IMG] متاحة
كود HTML معطلة

الانتقال السريع


 المكتبة العلمية | المنتدى | دليل المواقع المقالات | ندوات ومؤتمرات | المجلات | دليل الخدمات | الصلب المشقوق وعيوب العمود الفقري | التوحد وطيف التوحد  | متلازمة داون | العوق الفكري | الشلل الدماغي | الصرع والتشنج | السمع والتخاطب | الاستشارات | صحة الوليد | صحة الطفل | أمراض الأطفال | سلوكيات الطفل | مشاكل النوم | الـربـو | الحساسية | أمراض الدم | التدخل المبكر | الشفة الارنبية وشق الحنك | السكري لدى الأطفال | فرط الحركة وقلة النشاط | التبول الليلي اللاإرادي | صعوبات التعلم | العوق الحركي | العوق البصري | الدمج التربوي | المتلازمات | الإرشاد الأسري | امراض الروماتيزم | الصلب المشقوق | القدم السكرية



الساعة الآن 02:10 AM.